Neurophysiologie de Marseille (CRN2M) UMR6231 Equipe 2

- Modèle carragénine :
Injection de 20µl de 3% de carragénine dans du sérum physiologique
stérile. La carragénine est polysaccharide issu d’algues rouges, utilisé
comme épaississant dans l’industrie agro-alimentaire. En injection
intra-plantaire à une concentration de 3%, la carragénine provoque
une douleur aiguë (sans léchage spontané de la patte injectée) avec
un pic douloureux 8-10h après l’injection et qui se résorbe au bout de
48-72h. Le seuil douloureux est mesuré à 8, 16 ou 24h à l’aide de
filaments de Von Frey. Les animaux sont ensuite sacrifiés. Les
ganglions rachidiens L3, L4 et L5 ipsilatéraux sont prélevés dans de
but de mettre en culture les neurones sensitifs qui innervent la patte
injectée (pour mesurer de l’activité du canal par des enregistrements
électrophysiologiques) ou de faire des coupes de tissus (marquage
immunologique). A aucun moment le comportement de l’animal est
affecté (toilettage, activité locomotrice, activité d’exploration).
- Modèle de monoarthrite rhumatoïde :
Injection péri-articulaire sous anesthésie de 30µl (2x15µl) d’adjuvant
complet de freud à la cheville de la patte arrière. L’adjuvant de freud
provoque une réaction inflammatoire qui va entrainer une douleur
chronique, puisque la douleur va persister dans le temps. Le pic
douloureux se situe 3 jours après l’injection. Le seuil douloureux est
mesuré à 10 jours par le test de Von Frey. Les animaux sont ensuite
sacrifiés. Les ganglions rachidiens L3, L4 et L5 ipsilatéraux sont
prélevés dans de but de mettre en culture les neurones sensitifs qui
innervent la patte (pour mesurer de l’activité du canal par des
enregistrements électrophysiologiques) ou de faire des coupes de
tissus (marquage immunologique). A aucun moment le comportement
de l’animal est affecté (toilettage, activité locomotrice, activité
d’exploration).
Existe-t-il des méthodes alternatives pour réaliser ce travail : Si OUI justifiez leur non
utilisation :
NON
Espèces animales qui seront utilisées :
souris (C57BL6, NaV1.9 KO)
Justifiez le choix de l'espèce animale et le nombre d'animaux utilisés :
Nous utilisons la souris, car nous possédons une souris knock-out pour le canal NaV1.9.
Pour les modèles carragénine et monoarthrite rhumatoïde : pour les cultures de neurones, 3
ganglions sont prélevés par animal et 15 ganglions sont nécessaires pour la mise en culture,
donc 5 animaux par culture. Un N=6-10 est nécessaire dans chaque condition (sauvage et
transgénique, carragénine et monoarthrite rhumatoïde). Pour l’immunohistochimie nous auront
besoin d’environ 10 souris par condition. Par conséquent, nous aurons besoin d’environ 70-
110 souris sauvages et 70-110 souris transgéniques.
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