Neurophysiologie de Marseille (CRN2M) UMR6231 Equipe 2

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- Test de Von Frey : Test qui permet de mesurer le seuil de tolérance à la douleur. L’animal est placé dans une cage en plexiglas posée sur une surface grillagée surélevée. On applique sur la surface plantaire de la patte arrière injectée des filaments ayant une force de pression croissante, jusqu’à la pression qui entraine le réflexe de retrait de la patte. Cette pression représente le seuil de tolérance de l’animal. Le filament ayant provoqué le retrait de la patte est testé 3 fois à 10-15 minutes d’intervalle pour confirmer le test. Durant toute la durée du test, l’animal est sous surveillance et à aucun moment son comportement n’est modifié (toilettage, activité locomotrice, activité d’exploration). - Test de cold plate / hot plate : Test qui mesure la latence de réaction de l’animal à une stimulation thermique d’intensité constante. La souris est placée sur une surface métallique dont la température est fixée (de 15°C à -4°C pour les températures froides, à 54°C pour les températures chaudes). Nous mesurons le temps nécessaire pour que l’animal cherche à échapper à cette stimulation thermique en sautant de la plaque. Les animaux ne présentant aucun comportement de fuite sont retirés de la plaque au bout de 60 secondes. Existe-t-il des méthodes alternatives pour réaliser ce travail : Si OUI justifiez leur non utilisation : NON Espèces animales qui seront utilisées : Souris (C57BL6, TRPA1 KO, PC1 KO conditionnel) Justifiez le choix de l'espèce animale et le nombre d'animaux utilisés : Nous utilisons la souris, car nous possédons des lignées de souris KO conditionnel pour la polycystine 1 (PC1) ainsi que des souris knock-out pour le canal TRPA1. Selon la reproductibilité des résultats pour chaque condition, nous estimons qu’il faudra 15 à 20 souris mâles par condition (saline ou oxaliplatine) et par lignée de souris, soit un total de 90 à 120 souris. Procédures de gestion de la douleur et moyens mis en œuvre pour gérer la souffrance : (joindre les procédures validées à cette demande) : - Nous ne pouvons pas gérer la souffrance, car elle fait l’objet de l’étude. Toutefois, nous minimisons la durée de temps dont l’animal fera face à la douleur et continuons notre étude par des expérimentations in vitro. - L’intensité de la douleur est mesurée par le test de Von Frey et de Cold/Hot plate. - Si les animaux présentent des signes cliniques manifestes de souffrance (tels que la perte de poids, une érection pileuse ou un engourdissement/paralysie des membres postérieurs), la dose 52
d’oxaliplatine injectée sera réduite jusqu’à obtenir un modèle animal de souffrance induite acceptable. Le signataire (nom, date et signature) Nom du responsable du protocole : Lise Rodat-Despoix Date : 06/10/2011 Liste des documents joints à cette demande : Articles de référence Le cas échéant, réponse et avis motivé du comité régional d’éthique en expérimentation animale : Récépissé de déclaration du directeur départemental des services vétérinaires adressé le : 53
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