DVD Expérimentons sur les enzymes - Pierron

Séquence 7 : " la caséine est hydrolysée en acidesaminées par la protéase ".On utilise une technique de chromatographie sur couche mince (CCM). On utilise uneplaque cellulose sur support polyester (temps d'élution plus courts et tâches plus compactes).On dispose de cinq verres de montre dans lesquels on dépose respectivement 1mL de solutionde caséine, 1 mL de solution de leucine, 1 mL de solution de glycine, 1 mL de solutiond’arginine, 1 mL d’une solution de caséine hydrolysée. Prendre une pipette capillaire parverre de montre et déposer, sécher chaque goutte pour faire trois dépôts successifs. Placer laplaque dans la chambre à chromatographie garnie du solvant adéquat. Laisser migrer 60minutes. Révéler à la nihydrine : attention, opération à faire par un adulte sous la hotte dulaboratoire.Séquence 8 : " la pancréatine agit sur l’huile ".Chauffer 100 mL d'huile d'olive à 50°C à l'aide d'un agitateur chauffant. Préparer unesolution de carbonate disodique : verser, goutte à goutte le carbonate puis laisser refroidir.Après 24h, jeter la phase aqueuse, ajouter de l'eau distillée, mélanger et laisser décanter.Vérifiez le pH et recommencer les opérations jusqu'à obtention d'une huile neutralisée.Filtrer.Verser dans deux tubes à essais 5 mL de cette huile neutre, une goutte de liquide à vaisselle(acquisition d'une émulsion stable), deux à trois gouttes de tournesol (indicateur de pH). Dansl'un ajouter 1 mL de pancréatine, dans l'autre 1 mL d'eau distillée.Placer les tubes au bain-marie à 37° C. Après deux heures, on peut observer le virage dutournesol au rouge sous l'action de l'hydrolyse des triglycérides.Séquence 9 : " une synthèse enzymatique ".Râper une pomme de terre sur un cristallisoir entouré de glaçons, ajouter 50 mL d 'eaudistillée froide. Après quelques minutes de macération, filtrer le mélange en veillant àrecueillir le filtrat dans un récipient entouré de glaçons. Effectuer un prélèvement et le testerà l'eau iodée pour mettre en évidence l'absence d'amidon.Verser dans un tube à essai 2 mL du substrat et 2 mL d'une solution de glucose - 1phosphate.Placer le tube au bain-marie à 37 °C.Effectuer un prélèvement toutes les deux minutes et le tester à l'eau iodée.Au bout de quelques minutes, la coloration bleue de l'amidon apparaît : il y a eu synthèse àpartir du glucose-1-phosphate et d'une enzyme présente dans le filtrat.212897