DVD Expérimentons sur les enzymes - Pierron

Partie 3 : Pepsine / albumineSéquence 5 : " la pepsine agit sur l’albumine ".On verse une solution d’albumine dans deux tubes à essais. On ajoute dans un tube quelquesgouttes de pepsine et dans l’autre l’équivalent en eau distillée. Les deux tubes sont placésdans un bain-marie à 37 degrés Celsius pendant 40 minutes.Le trouble observé dans les tubes au départ, provoqué par la présence d’albumine, disparaîtdans le tube contenant la pepsine. Cet enzyme a donc eu une action aboutissant à ladisparition de l’albumine.Durée : 1 minute et 30 secondesSéquence 6 : " l’action de la pepsine dépend du pH ".Dans trois tubes à essais contenant de l’albumine, on ajoute un acide, de l’eau distillée ou unebase afin d’obtenir 3 pH très différents : un acide à 1,63, un neutre à 6,65 et un basique à9,86. La pepsine est alors ajoutée dans les 3 tubes. Les trois tubes sont placés dans un bainmarieà 37 degrés Celsius pendant 20 minutes.On constate que le trouble lié à la présence d’albumine disparaît seulement à pH acide. LepH a donc une action importante sur l’activité de l’enzyme.Durée : 1 minute et 40 secondesPartie 4 : Protéase / caséineSéquence 7 : " la caséine est hydrolysée en acidesaminées par la protéase ".On réalise une chromatographie avec des solutions d’acides aminés, une protéine entière, lacaséine, et celle-ci hydrolysée par une protéase. Chaque solution est déposée goutte à gouttesur le support à chromatographie. Un sèche cheveux permet de faciliter l’évaporation dessolvants. La plaque est placée dans une enceinte contenant le solvant de chromatographie. Cedernier entraîne les molécules différemment en fonction de leur taille. Une révélation de laplaque avec de la nihydrine permet de visualiser les acides aminés.On constate que la protéine entière n’est pas visible. Elle n’a que très peu migré. Les 3acides aminés servent de témoins et permettent d’affirmer la présence de leucine et deglycine dans la caséine par comparaison avec les acides aminés ayant migré suite àl’hydrolysât de la protéine.Durée : 1 minute et 40 secondes212893