Nettoyage des instruments chirurgicaux réutilisables:
Nettoyage des instruments chirurgicaux réutilisables: Nettoyage des instruments chirurgicaux réutilisables:
nous avons décidé, pour déterminer laconcentration protéinique avec Pro-tect, demesurer la densité optique 30 minutes àcompter du moment où le bâtonnet avaitété introduit dans le tube.Figure 4: courbe standard pour le réactifPro-tect, après la réaction avec les bâtonnetsimbibés des solutions de 5, 10, 25, 50,100 et 300 µg de protéines par 100 µl. Lacourbe standard avait la forme d’un bol àl’envers. L’absorption était de 0,274 pour 10µg de protéines, de 0,690 pour 50 µg deprotéines, de 1,230 pour 100 µg de protéineset de 2,220 pour 300 µg de protéines.La figure 5 présente les résultats de la colorationau noir d’amide 10 B de plaquettesen acier inoxydable sur lesquelles avaientété déposés 100 µl d’une solution concentréeà 5, 25, 50 et 100 µg de protéines par100 µl. Si nous n’avons pas pu constater denette coloration bleue pour la plaquetteavec 5 µg de protéines, la coloration étaitpar contre marquée à partir de 25 µg deprotéines et plus. La figure 6 montre lerésultat 30 minutes après avoir frotté lessolutions de même concentration avec lesbâtonnets et après la réaction avec le réactifPro-tect. La densité optique du réactifaprès la réaction était de 0,154 pour 5 µgde protéines, de 0,452 pour 25 µg de protéineset de 0,630 pour 50 µg de protéines.La figure 7 montre ces mêmes échantillonsaprès avoir déposé 20 µl de sang sur lesConcentration protéinique (µg)Contrôle (0) 5 25 50 100Fig. 5: Sensibilité de mise en évidence de la méthode de coloration fixant les protéines.Concentrationprotéinique (µg)Contrôle (0) 5 25 50 100Réactif après la réaction(des 5 sets)Densité optique(de 5 6 0 nm)0.154 0.452 0.630 1.230RéactionFig. 6: Sensibilité de mise en évidence de la méthode Pro-tect®.14
forumMéthodeDilutionAucune 10 × 40 × 100 × 400 ×Méthode de colorationfixant les protéinesConcentration d’ATP(mol/ml)8080 × 10 –11369 × 10 –11 24.5 × 10 –11 8.33 × 10 –11 2.21 × 10 –11MéthodePro-tect®Réactif aprèsla réactionConcentrationprotéinique(µg)100 ouplus50 ~ 100 25 ~ 50 5 ~ 25 0 ~ 5Fig. 7: Résultats des mesures effectuées avec la méthode de coloration fixant les protéines, avec la méthode Pro-tect® et avec la mesure de laconcentration de l’adénosine triphosphate (ATP) avec du sang sur des plaquettes en acier inoxydable.plaquettes en acier inoxydable, leur apparenceaprès coloration au noir d’amide 10 B,les concentrations d’ATP des bâtonnets quiavaient été passés sur les plaquettes enacier, des photos du réactif Pro-tect aprèsla réaction ainsi que les concentrations protéiniquesdéterminées sur la base des résultatsde la figure 6. Lors d’une dilution de400 fois du sang, la coloration bleue était àpeine discernable, mais dès une dilution de100, une légère coloration bleue étaitvisible. A l’inverse, avec Pro-tect, nousavons pu constater à l’œil nu que pour lesang dilué d’un facteur de 10, la quantitéde protéines devait se situer entre 50 et100 µg et que pour le sang dilué 100 fois,elle devait être comprise entre 5 et 25 µg.Les mesures de concentration d’ATP ont,quant à elles, permis d’enregistrer desvaleurs quantitatives (2,21 x 10-11mol/ml), même pour le sang dilué 400 fois.DiscussionSi l’on veut garantir une stérilisation irréprochable,il est indispensable de nettoyer aupréalable les instruments chirurgicaux, afinde les débarrasser de souillures résiduellestenaces telles que le sang. Or pour contrôlerles résultats de ce nettoyage, l’on doit pouvoirdéterminer la quantité de protéines etd’autres souillures résiduelles sur les instrumentsnettoyés. Toutefois, les méthodes quiont cours actuellement – comme l’inspectionvisuelle après le nettoyage pour voir s’il resteencore des substances sur les instruments oule processus de coloration des protéines, quiimplique également un contrôle visuel –, cesméthodes dépendent largement du jugementsubjectif de la personne chargée du contrôleet elles ne permettent pas de fournir desdonnées quantifiables.Le produit Pro-tect, dont le test fait l’objetdu présent rapport, fonctionne de manièretrès simple. Il suffit en effet de frotter lasurface de l’instrument à tester avec unbâtonnet de ouate et d’introduire ensuitecelui-ci dans le petit tube en plastique livréà cet effet et contenant un réactif deBiuret. Les processus difficiles à mettre enœuvre ou exigeant des réactifs ou des appareilsspéciaux ne réussiront pas à s’imposerdans les services de stérilisation centrale,déjà très sollicités. Dans cette optique, Protectpeut être considéré comme un bon processusde mesure des résultats du nettoyagedes instruments.La sensibilité de mesure de Pro-tect estrelativement bonne. Comme le montre eneffet l’illustration 6, la personne chargée dutest peut, à l’œil nu, déterminer de manièrefiable la présence de protéines dès 25 µgdéjà. Certes, la méthode de coloration aunoir d’amide 10 B permet également dedétecter 25 µg de protéines, mais elleimplique de renettoyer l’instrument testéafin d’éliminer la solution colorante.Lorsque nous avons prélevé au moyen desbâtonnets Pro-tect le sang dilué sur les plaquettesen acier inoxydable et que nousavons effectué les mesures conformémentaux photos, qui montrent les réactions parcoloration pour 100 µl de solution respectivementà 5, 25, 50 et 100 µg de protéines(fig. 6), Pro-tect nous a permis de déterminerdes valeurs semi-quantitatives de protéinesdans des fourchettes de 5–25 µg ou de 50-100 µg (fig. 7). Certes, le noir d’amide 10 Bpermet également d’obtenir des valeurs semiquantitativeslorsque l’on procède à une élutionde la coloration bleue dans une solutionbasique, mais l’obtention de l’élution exigebeaucoup de temps et de travail, et la solutiond’extraction risque, dans certains cas,d’endommager l’instrument. Par conséquent,15
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nous avons décidé, pour déterminer laconcentration protéinique avec Pro-tect, demesurer la densité optique 30 minutes àcompter du moment où le bâtonnet avaitété introduit dans le tube.Figure 4: courbe standard pour le réactifPro-tect, après la réaction avec les bâtonnetsimbibés <strong>des</strong> solutions de 5, 10, 25, 50,100 et 300 µg de protéines par 100 µl. Lacourbe standard avait la forme d’un bol àl’envers. L’absorption était de 0,274 pour 10µg de protéines, de 0,690 pour 50 µg deprotéines, de 1,230 pour 100 µg de protéineset de 2,220 pour 300 µg de protéines.La figure 5 présente les résultats de la colorationau noir d’amide 10 B de plaquettesen acier inoxydable sur lesquelles avaientété déposés 100 µl d’une solution concentréeà 5, 25, 50 et 100 µg de protéines par100 µl. Si nous n’avons pas pu constater denette coloration bleue pour la plaquetteavec 5 µg de protéines, la coloration étaitpar contre marquée à partir de 25 µg deprotéines et plus. La figure 6 montre lerésultat 30 minutes après avoir frotté lessolutions de même concentration avec lesbâtonnets et après la réaction avec le réactifPro-tect. La densité optique du réactifaprès la réaction était de 0,154 pour 5 µgde protéines, de 0,452 pour 25 µg de protéineset de 0,630 pour 50 µg de protéines.La figure 7 montre ces mêmes échantillonsaprès avoir déposé 20 µl de sang sur lesConcentration protéinique (µg)Contrôle (0) 5 25 50 100Fig. 5: Sensibilité de mise en évidence de la méthode de coloration fixant les protéines.Concentrationprotéinique (µg)Contrôle (0) 5 25 50 100Réactif après la réaction(<strong>des</strong> 5 sets)Densité optique(de 5 6 0 nm)0.154 0.452 0.630 1.230RéactionFig. 6: Sensibilité de mise en évidence de la méthode Pro-tect®.14
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