Nettoyage des instruments chirurgicaux réutilisables:

titativement les souillures résiduelles.Quant à la mesure de la concentration d’ATPrésiduel au moyen d’un indicateur, celle-ciest plus précise et fournit en outre des indicationsquantitatives. Par contre, ellenécessite l’utilisation d’un réactif ainsi qued’un appareil spécial de mesure de la luminescence;elle n’est par conséquent pas trèsrépandue. Dans ce contexte, la nécessitéapparaît clairement de disposer d’uneméthode simple, permettant de mesurerquantitativement les résultats du nettoyagedes instruments.Nous avons donc analysé le système Protect– qui se compose d’un bâtonnet deouate à frotter l’instrument et d’un réactifpermettant de mesurer la concentration desprotéines –, afin de déterminer si ce produitest capable de mesurer les résultats du nettoyagedes instruments.Nos tests ont montré que Pro-tect permetde prouver la présence de protéines jusqu’àune quantité aussi faible que 25 µg environ,le tout au moyen d’un test de frottistrès simple sur l’instrument. Ce résultatnous semble tout à fait remarquable et c’estla raison pour laquelle nous présentons ciaprèsun rapport portant sur l’efficacité dePro-tect; nous nous fondons sur des donnéesde performances élémentaires, notammentsur les courbes standard obtenues surla base de solutions protéiniques diluéesainsi que sur une comparaison de la sensibilitédes mesures Pro-tect et de la méthodede coloration des protéines.Matériaux et méthodesKit de test de nettoyage par frottisLe produit que nous avons testé s’appellePro-tect® (Biotrace International plc. Bridgend,Grande-Bretagne); il s’agit d’un kitde test de nettoyage par frottis (fig. 1). Cekit comprend un bâtonnet de ouate à frottersur la surface de l’instrument ainsi qu’unpetit tube synthétique contenant un réactifde Biuret (750 µl) (fig. 2, 3) servant àmesurer la concentration protéinique. Aprèsavoir été passé sur l’instrument, le bâtonnetest introduit dans le tube synthétique parl’ouverture du haut. Ce faisant, le bâtonnettransperce une membrane protectrice à l’intérieurdu tube et entre en réaction avec leréactif de Biuret, qui vire de couleur, enfonction de la quantité de protéines présentes.Fig. 1: Apparence du kit de test Pro-tect® (Biotrace Co., Ltd.)Processus de mesure pour déterminer lescourbes d’absorption du réactif de BiuretPro-tect et de l’échantillonLe réactif Pro-tect de 5 kits a été pipeté etintroduit dans une cuvette en verre de 1 x 1cm. La plage de mesure d’un spectrophotomètreUV-lumière visible Shimadzu 1240(Shimadzu Co., Ltd., Kyoto, Japon) a étéréglée entre 400 et 700 nm, et la densitéoptique du réactif (contrôle) a été mesurée àdes intervalles de 20 nm. Ensuite, 100 µl deplasma (obtenus par centrifugation de sanghéparinisé à 3000/min pendant 5 minutes)ont été ajoutés au réactif puis, 30 minutesaprès le mélange, la densité optique del’échantillon a été mesurée selon la mêmeméthode que pour le réactif de contrôle.Evolution dans le temps de la densitéoptique du réactif de Biuret Pro-tectLe réactif Pro-tect de 5 kits a été pipeté etintroduit dans une cuvette en verre de 1 x 1cm. 20 µl de plasma (obtenus par centrifugationde sang héparinisé à 3000/min pendant5 minutes) ont été ajoutés au réactif etintroduit dans la cuvette (échantillon A); ladensité optique de cet échantillon a ensuiteété mesurée à 560 nm toutes les 10 minutesaprès le mélange, pendant 60 minutes. 20 µlde plasma, dilué quatre fois dans une solutionsaline physiologique, ont ensuite étéintroduits dans une autre cuvette, danslaquelle on a ajouté le réactif de 5 autreskits de test Pro-tect (échantillon B). La densitéoptique a, dans ce cas également, étémesurée selon la même méthode.Courbe standard Pro-tectDu Chem Trak Puratinum (Medical AnalysisSystem, Inc., Californie, USA) a été diluédans une solution saline physiologique desorte à obtenir une concentration protéiniquetotale respectivement de 5, 10, 25,50, 100 et 300 µg/100 µl; chaque solutiondiluée a ensuite été absorbée par 5 bâtonnetsPro-tect. Puis ceux-ci ont été introduitsdans les petits tubes synthétiquesprévus à cet effet, pour déclencher la réaction.Après 30 minutes, le réactif avecl’échantillon de chacun des 5 tubes demême concentration a été pipeté dans unecuvette et la densité optique de chaqueéchantillon a été mesurée à 560 nm.Comparaison de la sensibilité de mesureentre la méthode de coloration des protéineset la méthode Pro-tect100 µl de Chem Trak Puratinum, dilué à desconcentrations protéiniques de 5, 25, 50 et100 µg/100 µl, ont été déposés sur 3 plaquettesen acier inoxydable (15 x 50 mm),qui ont séché pendant 3 heures à températureambiante. Chacune des plaquettes enacier inoxydable a ensuite été immergéependant 5 minutes dans une solution denoir d’amide 10 B (fig. 4, 5) (Clean ChemicalCo., Ltd., Osaka, Japon), un colorant quise fixe aux protéines, puis rincée pendant 1minutes sous l’eau courante avant d’êtreremise à sécher à température ambiante.100 µl de solutions protéiniques concentréesà 5, 25, 50 et 100 µg/100 µl ont étépipetés sur 5 bâtonnets Pro-tect. Une foisles solutions absorbées, les bâtonnets ontété introduits dans les petits tubes synthétiquesprévus à cet effet, pour déclencher laréaction. Après 30 minutes, le réactif avecl’échantillon de chacun des 5 tubes demême concentration a été pipeté dans unecuvette et la densité optique de chaqueéchantillon a été mesurée à 560 nm.12