Bioconversion de l'acide p-coumarique par Brettanomyces ...

Matériels et Méthodes3.5.4.3.Conditions opératoiresL’injecteur automatique a été utilisé en boucle pleine de 20 μL. La phase mobile avait lacomposition suivante : eau ultra pure 77% et acétonitrile 23%. L’acide formique a été ajoutépour avoir une concentration de 0,12 g/L, ce qui correspond à un volume de 120 μL d’acideformique dans chaque litre de solution de phase mobile. L’acide formique a pour butd’imposer un pH de 3,5 à la phase mobile. Le débit de la pompe a été fixé à 0,7mL/min, et latempérature à 30 o C tout au long de l’analyse.3.5.4.4.Détection et quantificationLa quantification des pics est basée sur la variation des aires en fonction de laconcentration, par rapport à des courbes de calibration, effectuées dans une zone de linéaritésituée entre 0,5 et 20 mg/L d’acide p-coumarique. Les courbes d’étalonnages ont étéeffectuées à partir de dilutions d’une solution mère d’acide p-coumarique dissous dans unesolution hydroalcoolique (eau – éthanol 10%).3.6. Dosage du 4-vinylphénol et du 4-éthylphénolLes 4-vinylphénols et 4-éthylphénol ont été dosés et suivis au cours des différentes étudespar chromatographie en phase gazeuse, précédée d’une phase d’extraction sur fibre (SPME).La détection a été effectuée par spectrométrie de masse. En effet, depuis un certain temps,l’extraction des composés volatils dans une matrice complexe se réalise sans le biais d’unsolvant, par une méthode d’extraction et de concentration physico-chimique. Une préparationdes échantillons préalable à l’analyse est nécessaire.3.6.1. Préparation des vials3.6.1.1.La gamme d’étalonnageUn volume de milieu matrice de 8 mL est mélangé avec 40µL de diméthylphénol (DMP)qui joue le rôle d’étalon interne de concentration 100 mg/L. Du NaCl à 375 g/L (3g pour 8mL) est ajouté au mélange pour favoriser la volatilisation du 4-éthylphénol et du 4-vinylphénol. Toute la préparation est versée dans un flacon de 20 mL. Ce dernier est bouchéhermétiquement avec un bouchon métallique contenant un septum.59