Bioconversion de l'acide p-coumarique par Brettanomyces ...

More documents

Recommendations

Info

Matériels et Méthodes3.5.1. Spectrophotométrie en UVA cause de leur structure, les acides phénoliques ont l’aptitude à absorber en UV. Ainsi,l’acide p-coumarique a deux pics d’absorption. L’absorbance en solution de cet acide a étéprise après un balayage de la longueur d’onde entre 250 et 380 nm. Les pics d’absorptionmaximals dans une solution hydroalcoolique (10% éthanol) ont été retenus : le premier estsitué à 280 nm et le second à 305 nm.D’après la loi de Lambert-Beer, l’absorbance est proportionnelle à la concentration d’uncomposé absorbant à une longueur d’onde déterminée dans un milieu donné :A = ε l COù A est l’absorbance, ε la permittivité du milieu, l le trajet optique et C la concentrationdu composé. Les droites d’étalonnage ont été établies dans différentes matrices. Des cuves enquartz de trajet optique 1 cm ont été utilisées. Le domaine de linéarité a été validé entre 0,5 et25 mg/L. Au delà de ces valeurs, l’absorbance dépassait 0,9 et une dilution adéquate deséchantillons a été effectuée.3.5.2. Spectroscopie en IR : Dosage de l’acide p-coumariqueLa spectroscopie Infra rouge correspond aux niveaux d’énergie vibrationnelle desmolécules. Les spectres de l’acide p-coumarique pur, ainsi que de l’acide p-coumarique dansl’éthanol ont été enregistrés sur un spectrophotomètre infra-rouge à transformé de FourrierShimadzu-8300, avec une résolution de 2 cm -1 . La concentration de l’acide p-coumariqueétait de 40 mg/L et le pH avait été ajusté avec de l’acide sulfurique à 3,5.3.5.3. Résonnance magnétique nucléaire : Dosage de l’acide p-coumariqueLa spectroscopie de résonnance magnétique nucléaire (RMN) est basée sur la mesure del’absorption d’ondes électromagnétiques dans le domaine des fréquences radio (4-1000MHz). Contrairement à l’absorption dans l’ultraviolet, le visible et l’infrarouge, ce sont lesnoyaux des atomes et non plus les électrons qui sont impliqués dans le phénomèned’absorption. Ainsi, ces noyaux absorbent une onde électromagnétique suite à la séparationdu niveau d’énergie induite par un champ magnétique puissant. L’effet de l’environnementchimique et du couplage spin-spin jouent un rôle important dans l’analyse de structure car ceteffet est direct sur le déplacement chimique des pics du spectre.Les séquences des spectres 1H, et 13C, DEPT NMR ont été enregistrées sur unspectromètre Brüker, 300 MHZ. Le solvant utilisé est du DMSO deutéré. Les déplacementschimiques sont donnés en ppm, relativement au pic du solvant résiduel, comme une référence57
Matériels et Méthodeshétéronucléaire pour le 1H et le 13C. Les abréviations utilisées pour les signaux sont : s,singlet; d, doublet; t, triplet; q, quartet; m, multiplet; dd, doublet dédoublé.Dans notre cas d’étude, une solution d’acide p-coumarique 40 mg/L a été préparée dansde l’éthanol pur, où le pH a été ajusté à 3,5 avec une solution d’acide sulfurique. Le spectreRMN de cette solution a été comparé avec celui de l’acide p-coumarique pur. De même, uneautre solution d’acide p-coumarique (40 mg/L) avec de l’acide tartrique (2 g/L) a été préparéeet son pH a été ajusté à 3,5. Le spectre RMN de cette solution a été aussi comparé avec lesspectres de l’acide p-coumarique pur et celui de l’acide tartrique pur, en fonction du temps.3.5.4. ChromatographieL’ensemble des méthodes analytiques présentées jusqu’alors était des méthodes existantesdans la bibliographie. Les méthodes qui sont développées ici ont été mises au point lors denos travaux. Nous ne présenterons ici que le matériel utilisé et les conditions générales de laméthode. Le détail et la validation des méthodes feront l’objet du chapitre 4.3.5.4.1.Préparation des échantillonsAprès prélèvement, les échantillons sont stockés à -20 o C. Avant l’analyse HPLC, 1 mLd’échantillon a été prélevé puis filtré sur une membrane stérile de 0,4 μm de diamètre depores, directement dans des flacons en verre de 1,5 mL de volume total. Un septum encaoutchouc et un bouchon en plastique obturaient hermétiquement les échantillons.3.5.4.2.Système et appareillageL’acide p-coumarique présent dans les échantillons a été dosé grâce à un système“Thermo Separation High performance Liquid Chromatography”, équipé d’un détecteur UV150 (Spectra series) à balayage. La longueur d’onde a été fixée à 305nm. Un passeurd’échantillon automatique à température contrôlée (autosampler AS 100) est utilisé. Lelogiciel PC 1000 ChromStation – Thermoseparation products TM a été utilisé pourl’acquisition des donnés ainsi que pour l’analyse et l’intégration des pics. La colonne ODS-25μ TM (Waters ® ) (4.6 x 250 mm) munie de la précolonne Spherimarge ODS-2 permet laséparation.58
Page 1 and 2:
N° d’ordre :………………TH
Page 3 and 4:
Quantum potes, tantum aude …(St T
Page 5 and 6:
Il l’appelait « la Saga » dans
Page 7 and 8:
SommaireListe des Figures..........
Page 9 and 10:
3.5.2. Spectroscopie en IR : Dosage
Page 11 and 12:
5.2. Etude de l’évolution de la
Page 13 and 14:
Liste des FiguresFigure I. 1. Proc
Page 15:
Figure VI. 16. Vitesses de disparit
Page 18 and 19:
Tableau V. 3. Différentes valeurs
Page 20:
Introduction Générale1
Page 23 and 24:
Introduction GénéraleCes deux ins
Page 26: SynthèseBibliographique7
Page 29 and 30: Synthèse BibliographiqueLors de l
Page 31 and 32: Synthèse BibliographiqueFigure I.
Page 33 and 34: Synthèse BibliographiqueA ces arô
Page 35 and 36: Synthèse BibliographiqueDepuis la
Page 37 and 38: Synthèse Bibliographique4.1. Prés
Page 39 and 40: Synthèse BibliographiqueLe meilleu
Page 41 and 42: Synthèse BibliographiqueCH 2CH 2CH
Page 43 and 44: Synthèse BibliographiqueTableau I.
Page 45 and 46: Synthèse BibliographiqueLe 4-vinyl
Page 47 and 48: Synthèse BibliographiqueAinsi, la
Page 49 and 50: Synthèse Bibliographiquerend l’e
Page 51 and 52: Synthèse BibliographiqueAinsi, l
Page 53 and 54: Synthèse BibliographiqueEn contrad
Page 55 and 56: Synthèse BibliographiqueLes traite
Page 57 and 58: Synthèse Bibliographiqued’extrac
Page 59 and 60: Synthèse BibliographiqueLa diverge
Page 62 and 63: Matériels et Méthodes1. Etude de
Page 64 and 65: Matériels et Méthodes1.3. Prépar
Page 66 and 67: Matériels et Méthodes1.7. Prélè
Page 68 and 69: Matériels et MéthodesUne fois l
Page 70 and 71: Matériels et MéthodesCar en effet
Page 72 and 73: Matériels et MéthodesLa concentra
Page 74 and 75: Matériels et MéthodesLe système
Page 78 and 79: Matériels et Méthodes3.5.4.3.Cond
Page 80 and 81: Matériels et MéthodesSeptumVialPe
Page 82 and 83: Matériels et MéthodesLe Spectrosc
Page 84: Matériels et Méthodeso La vitesse
Page 90 and 91: Mise au point des methods analytiqu
Page 110: Quatrième Chapitre :“Disponibili
Page 113 and 114: Disponibilité de l’acide p-couma
Page 127 and 128:
Disponibilité de l’acide p-couma
Page 129 and 130:
Page 131 and 132:
Page 133 and 134:
114
Page 135 and 136:
116
Page 137 and 138:
Traitement des vins par adsorption
Page 139 and 140:
Page 141 and 142:
Page 143 and 144:
Page 145 and 146:
Page 147 and 148:
Page 149 and 150:
Page 151 and 152:
132
Page 153 and 154:
134
Page 155 and 156:
Etude cinétique de la bioconversio
Page 157 and 158:
Page 159 and 160:
Page 161 and 162:
Page 163 and 164:
Page 165 and 166:
Page 167 and 168:
Page 169 and 170:
Page 171 and 172:
Page 173 and 174:
Page 175 and 176:
Page 177 and 178:
Page 179 and 180:
Page 181 and 182:
Page 183 and 184:
Page 185 and 186:
Page 187 and 188:
168
Page 189 and 190:
170
Page 191 and 192:
Conclusion GénéraleLa seconde tec
Page 193 and 194:
Conclusion GénéraleL’étude de
Page 195 and 196:
176
Page 197 and 198:
• BAKKER J., TIMBERLAKE C.F. (199
Page 199 and 200:
• CASTRO MARTINEZ C. (2007). Bret
Page 201 and 202:
• DIAS L., PEREIRA-DA-SILVA S., T
Page 203 and 204:
F• FALCETTI M., ASSELIN C. (1996)
Page 205 and 206:
• GRBIN P.R., MARKIDES A.J., HENS
Page 207 and 208:
• LICKER J.L., ACREE T. E., HENIC
Page 209 and 210:
• MORATA A., GOMEZ-CORDOVES M.C.,
Page 211 and 212:
• RENOUF V., FALCOU M., MIOT-SERT
Page 213 and 214:
• SOLEAS G.J., TOMLINSON G., DIAM
Page 215 and 216:
Z• ZAFRILLA P., MORILLAS J., MULE
Page 217 and 218:
198
Page 219 and 220:
Annexe 2Les Ecorces OFLes Ecorces O
Page 221 and 222:
Annexe 3CODEX OENOLOGIQUE INTERNATI
Page 223 and 224:
Publications197
Page 225 and 226:
ethanol before to be added in diffe
Page 227 and 228:
On the other hand, when the yeast c
Page 229 and 230:
Author's personal copy1662 D. Salam
Page 231 and 232:
Page 233 and 234:
show all

Bioconversion de l'acide p-coumarique par Brettanomyces ...

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?