Bioconversion de l'acide p-coumarique par Brettanomyces ...

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Etude cinétique de la bioconversionUne autre explication pourrait être avancée. En effet, l’accomplissement de labioconversion lors du premier ajout a peut être diminué notablement la concentration de cofacteursqui n’ont pas pu être régénérés pour permettre le passage du 4-vinylphénol en 4-éthylphénol.6. Etude de la bioconversion en fonction de la présence de Brettanomyces dans le milieu6.1. Etude de la bioconversion dans le surnageantComme nous retrouvons à la fois le 4-vinylphénol et le 4-éthylphénol dans le surnageant,il nous semblait intéressant de vérifier si la conversion du premier en 4-éthylphénol a lieudans le milieu extracellulaire. Une culture de Brettanomyces en phase stationnaire a étécentrifugée puis filtrée stérilement et répartie dans deux fioles d’erlenmeyer. 0,06 mmol/Ld’acide p-coumarique ont été ajoutés dans la première, et 0,3 mmol/L de 4-vinylphénolcommercial ont été ajoutés dans la deuxième. Des prélèvements ont eu lieu au cours dutemps.Les résultats montrent, après trois répétitions, que dans les deux cas, aucune productionde 4-éthylphénol en quantité significative n’a eu lieu. Cela nous amène à déduire que labioconversion n’a lieu qu’en présence de levures Brettanomyces dans le milieu. Les enzymesresponsables de la bioconversion ne sont pas excrétées par les levures. En se projetant dansun cadre œnologique, ces résultats montrent que l’apparition du 4-éthylphénol dans les vinsne peut pas avoir lieu après élimination de la population contaminante de levuresBrettanomyces, les enzymes ne pouvant pas être excrétées dans le milieu.6.2. Etude de l’effet de la population de Brettanomyces sur la quantité de 4-éthylphénolformée.Une population de Brettanomyces bruxellensis en phase stationnaire a été diluée dans untampon phosphate citrate (MT). Quatre concentrations cellulaires différentes ont été testées :10 4 -10 5 -10 7 -10 8 cell/mL. Après la mise en solution, 10 mg/L d’acide p-coumarique ont étéajoutés. Les cinétiques d’apparition du 4 éthylphénol par GC-MS et de disparition d’acidecoumarique par HPLC-UV ont été suivies en fonction du temps.163
Etude cinétique de la bioconversion0,0250,02mmol/L0,0150,010,00500 20 40 60 80 100Temps (h)Figure VI. 28. Profil cinétique de la bioconversion de l’acide p-coumariqueen 4-vinylphénol puis en 4-éthylphénol. Milieu (MT)Population : 10 8 cell/ml. (♦) p-coumarique,(♦) 4-vinylphénol, (♦) 4-éthylphénol, (♦) Bilan instantané.Bien que la chute initiale due au phénomène d’adsorption soit plus accentuée dans le milieutampon (cf. Ch 4), il apparaît que la bioconversion est équimolaire entre l’acide coumariqueretrouvé initialement et les 4-éthylphénols.Si l’on trace maintenant l’apparition des 4-éthylphénols pour les quatre populations delevures testées, il apparaît qu’elles sont liées aux quantités de levures présentes (Figure 29).mmol/L0,020,0180,0160,0140,0120,010,0080,0060,0040,00200 20 40 60 80 100Temps (h)Figure VI. 29. Profil cinétique de l’apparition du 4-éthylphénol. Milieu (MT)(♦) 10 4 cell/mL, (♦) 10 5 cell/mL, (♦) 10 7 cell/mL, (♦) 10 8 cell/mL.164
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3.5.2. Spectroscopie en IR : Dosage
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5.2. Etude de l’évolution de la
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