Bioconversion de l'acide p-coumarique par Brettanomyces ...

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Etude cinétique de la bioconversionLa deuxième étape de l’étude sera alors l’ajout de l’acide p-coumarique en phase stationnaire,afin de suivre sa bioconversion dans le milieu.0,060,050,04mmol/L0,030,020,0100 50 100 150 200 250Temps (h)Figure VI. 24. Cinétique de production du 4-éthylphénol à partir du 4-vinylphénol(♦) Bilan matière, (♦) 4-vinylphénol, (♦) 4-éthylphénol5.3.2. Impact de la présence de 4-vinylphénol initialement sur la bioconversionde l’acide p-coumariqueSur la figure 25 sont présentés les résultats de la fermentation réalisée avec la présence de4-vinylphénol dans le milieu initial et ajout de 10 mg/L d’acide p-coumarique lorsque leslevures Brettanomyces ont atteint la phase stationnaire, au bout de 110h environ. La premièrepartie de la fermentation est identique à la fermentation précédente : les 4-vinylphénolsconsommés sont intégralement et immédiatement retrouvés sous forme de 4-éthylphénolsdans le milieu extracellulaire.Lorsque l’acide p-coumarique est ajouté, il est complètement consommé en 100 henviron. Par contre, l’apparition de 4-vinylphénol et de 4-éthylphénol est inférieure à laquantité d’acide coumarique consommée. La chute du bilan traduit donc le stockage d’unepartie de l’acide p-coumarique dans la cellule.Seulement 0,015 mmol/L de 4-éthylphénols supplémentaires sont formés en 100h par l’ajoutde 0,06 mmol/L d’acide p-coumarique.159
Etude cinétique de la bioconversionmmol/L0,080,070,060,050,040,030,020,0100 50 100 150 200 250Temps (h)Figure VI. 25. Cinétique de production du 4-éthylphénol avec présence initiale de 4-vinylphénol(♦) Bilan matière, (♦) 4-vinylphénol, (♦) 4-éthylphénol, (♦) acide p-coumariqueCe comportement a été comparé avec une fermentation où l’acide p-coumarique a étéajouté sur une population en phase stationnaire (après 110h environ) s’étant développée dansle même milieu préfermenté par la souche BDX de Saccharomyces cerevisiae, mais qui étaitexempt d’acide p-coumarique à la base. Aucun 4-vinylphénol n’avait donc été produit et dece fait les Brettanomyces se sont développées sur le milieu préfermenté sans aucun substratde la bioconversion. Les résultats sont présentés sur la figure 26.0,060,050,04mmol/L0,030,020,0100 50 100 150 200 250Temps (h)Figure VI. 26. Cinétique de production du 4-éthylphénol dans un milieu préfermenté par Saccharomyces(♦) Bilan matière, (♦) 4-vinylphénol, (♦) 4-éthylphénol, (♦) acide p-coumarique.160
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3.5.2. Spectroscopie en IR : Dosage
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5.2. Etude de l’évolution de la
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