Bioconversion de l'acide p-coumarique par Brettanomyces ...

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Etude cinétique de la bioconversionEn effet, pour 0,05 mmol/L d’acide p-coumarique disponibles initialement, on ne retrouveque 0,03 mmol/L de 4-éthylphénol quand le précurseur est ajouté en début de la phase delatence et 0,035 mmol/L lorsqu’il est ajouté en début de phase de croissance. En revanche, laconcentration finale en 4-éthylphénol est de 0,05 mmol/L quand l’acide p-coumarique estajouté en début de phase stationnaire.Afin de vérifier si la différence entre l’acide p-coumarique disparu et le 4-éthylphénolapparu correspond à l’accumulation du produit intermédiaire 4-vinylphénol, le bilan matièreinstantané a été réalisé (somme des trois constituants au cours de la fermentation).Dans les deux premières expériences, lorsque l’acide p-coumarique est ajouté en début de laphase de latence ou bien en début de la phase de croissance, nous remarquons une diminutionde la valeur du bilan instantané au début de la bioconversion, suivi d’un retour à la valeurinitiale. Cette chute du bilan n’est pas observée lorsque l’acide p-coumarique est ajouté endébut de phase stationnaire (Fig. 15). Ainsi, au temps final et au temps initial, le bilan matièrede la bioconversion est vérifié, car tout l’acide coumarique disponible au temps zéro estretrouvé sous l’une des trois formes: p-coumarique, 4-vinylphénol ou/et 4-éthylphénol.La chute momentanée du bilan observée pour les deux premiers cas pourrait être expliquéepar l’accumulation dans la cellule de l’un des substrats ou produits. Une vitesse depénétration de l’acide p-coumarique plus rapide que sa vitesse de transformation en 4-vinylphénol pourrait par exemple expliquer une accumulation dans la cellule et donc parconséquent une chute de la somme des trois constituants dosés dans le milieu extracellulaire.4.2. Calculs des vitesses de consommation de l’acide p-coumarique et de l’apparition du4-éthylphénol en fonction de la phase de croissancePour essayer de comprendre dans quelle phase de croissance la cinétique de productiondes 4-éthylphénols a lieu de façon complète et rapide, les profils des différentes vitesses ontété tracés. A partir des données expérimentales, nous avons pu calculer la vitesse deconsommation de l’acide p-coumarique, ainsi que la vitesse d’apparition des 4-éthylphénolsen fonction du temps. Les résultats sont présentés sur les graphiques 16 et 17.149
Etude cinétique de la bioconversionVitesse de disparition (mmol/L/h)0,00450,0040,00350,0030,00250,0020,00150,0010,000500 50 100 150 200Temps (h)Figure VI. 16. Vitesses de disparition de l’acide p-coumariqueen fonction du temps aux différentes phases de la croissance(♦) latence, (♦) croissance, (♦) stationnaireNous remarquons que la vitesse de consommation de l’acide p-coumarique augmenteavec l’avancement de la phase de croissance de la population. La vitesse de consommationmaximale passe de 0,0004 mmol/L/h lorsque l’acide p-coumarique est ajouté en phase delatence, à 0,004 mmol/L/h lors de son ajout en phase stationnaire.vitesse d'apparition (mmol/L/h)0,0060,0050,0040,0030,0020,00100 50 100 150 200Temps (h)Figure VI. 17. Vitesses d’apparition des éthylphénolsen fonction du temps aux différentes phases de la croissance(♦) latence, (♦) croissance, (♦) stationnaire150
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3.5.2. Spectroscopie en IR : Dosage
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