Bioconversion de l'acide p-coumarique par Brettanomyces ...
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Etu<strong>de</strong> cinétique <strong>de</strong> la bioconversionEn effet, pour 0,05 mmol/L d’aci<strong>de</strong> p-<strong>coumarique</strong> disponibles initialement, on ne retrouveque 0,03 mmol/L <strong>de</strong> 4-éthylphénol quand le précurseur est ajouté en début <strong>de</strong> la phase <strong>de</strong>latence et 0,035 mmol/L lorsqu’il est ajouté en début <strong>de</strong> phase <strong>de</strong> croissance. En revanche, laconcentration finale en 4-éthylphénol est <strong>de</strong> 0,05 mmol/L quand l’aci<strong>de</strong> p-<strong>coumarique</strong> estajouté en début <strong>de</strong> phase stationnaire.Afin <strong>de</strong> vérifier si la différence entre l’aci<strong>de</strong> p-<strong>coumarique</strong> dis<strong>par</strong>u et le 4-éthylphénolap<strong>par</strong>u correspond à l’accumulation du produit intermédiaire 4-vinylphénol, le bilan matièreinstantané a été réalisé (somme <strong>de</strong>s trois constituants au cours <strong>de</strong> la fermentation).Dans les <strong>de</strong>ux premières expériences, lorsque l’aci<strong>de</strong> p-<strong>coumarique</strong> est ajouté en début <strong>de</strong> laphase <strong>de</strong> latence ou bien en début <strong>de</strong> la phase <strong>de</strong> croissance, nous remarquons une diminution<strong>de</strong> la valeur du bilan instantané au début <strong>de</strong> la bioconversion, suivi d’un retour à la valeurinitiale. Cette chute du bilan n’est pas observée lorsque l’aci<strong>de</strong> p-<strong>coumarique</strong> est ajouté endébut <strong>de</strong> phase stationnaire (Fig. 15). Ainsi, au temps final et au temps initial, le bilan matière<strong>de</strong> la bioconversion est vérifié, car tout l’aci<strong>de</strong> <strong>coumarique</strong> disponible au temps zéro estretrouvé sous l’une <strong>de</strong>s trois formes: p-<strong>coumarique</strong>, 4-vinylphénol ou/et 4-éthylphénol.La chute momentanée du bilan observée pour les <strong>de</strong>ux premiers cas pourrait être expliquée<strong>par</strong> l’accumulation dans la cellule <strong>de</strong> l’un <strong>de</strong>s substrats ou produits. Une vitesse <strong>de</strong>pénétration <strong>de</strong> l’aci<strong>de</strong> p-<strong>coumarique</strong> plus rapi<strong>de</strong> que sa vitesse <strong>de</strong> transformation en 4-vinylphénol pourrait <strong>par</strong> exemple expliquer une accumulation dans la cellule et donc <strong>par</strong>conséquent une chute <strong>de</strong> la somme <strong>de</strong>s trois constituants dosés dans le milieu extracellulaire.4.2. Calculs <strong>de</strong>s vitesses <strong>de</strong> consommation <strong>de</strong> l’aci<strong>de</strong> p-<strong>coumarique</strong> et <strong>de</strong> l’ap<strong>par</strong>ition du4-éthylphénol en fonction <strong>de</strong> la phase <strong>de</strong> croissancePour essayer <strong>de</strong> comprendre dans quelle phase <strong>de</strong> croissance la cinétique <strong>de</strong> production<strong>de</strong>s 4-éthylphénols a lieu <strong>de</strong> façon complète et rapi<strong>de</strong>, les profils <strong>de</strong>s différentes vitesses ontété tracés. A <strong>par</strong>tir <strong>de</strong>s données expérimentales, nous avons pu calculer la vitesse <strong>de</strong>consommation <strong>de</strong> l’aci<strong>de</strong> p-<strong>coumarique</strong>, ainsi que la vitesse d’ap<strong>par</strong>ition <strong>de</strong>s 4-éthylphénolsen fonction du temps. Les résultats sont présentés sur les graphiques 16 et 17.149