Bioconversion de l'acide p-coumarique par Brettanomyces ...

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3. Mise au point de la méthode de dosage des 4-vinyl et 4-ethyl phénolspar GC/MS…………………………………………………………………………….813.1. Conditions opératoires et paramètres de la méthode................................................. 843.2. Etude de la performance............................................................................................ 863.2.1. Etude de la répétabilité et de la stabilité des échantillons ................................ 873.3. Etude de l’effet de la matrice .................................................................................... 884. Conclusion...................................................................................................................... 89Quatrième Chapitre : « Disponibilité de l’acide p-coumarique dans unmilieu vin………………………………………………………………………….. 911. Problématique................................................................................................................ 932. Etude de la réactivité physique de l’acide p-coumarique.......................................... 932.1. Etude de la stabilité de l’acide p-coumarique avec l’oxygène et la lumière ............. 932.2. Etude de la stabilité de l’acide p-coumarique aux températures élevées. ................. 952.3. Constatations générales sur la dissolution de l’acide p-coumarique......................... 963. Etude de la réactivité chimique de l’acide p-coumarique ......................................... 983.1. Etude par UV de la réactivité de l’acide p-coumarique avec l’éthanol..................... 983.2. Etude de la réactivité de l’acide p-coumarique avec l’éthanol par RMN ............... 1003.3. Etude de la réactivité de l’acide p-coumarique avec l’éthanol par IR .................... 1033.4. Quantification de la réactivité de l’acide p-coumarique avec l’éthanol par HPLC. 1053.5. Etude de la réactivité de l’acide p-coumarique avec l’acide tatrique...................... 1064. Adsorption de l’acide p-coumarique sur les levures................................................ 1064.1. Etude de l’adsorption de l’acide p-coumarique sur Brettanomyces........................ 1064.2. Etude de l’adsorption de l’acide p-coumarique sur les levures Saccharomycescerevisiae................................................................................................................. 1105. Etude de l’adsorption du 4-éthylphénol sur Brettanomyces bruxellensis............... 1116. Conclusion du chapitre ............................................................................................... 112Cinquième Chapitre “Traitement des vins par adsorption de l’acide p-coumarique”............................................................................................................ 1151. Introduction ................................................................................................................. 1172. Les phénomènes d’adsorption.................................................................................... 1173. Définition du temps d’équilibre thermodynamique................................................. 1174. Réalisation du plan d’expériences et étude des isothermes d’adsorption.............. 1184.1. Etude de la signification des facteurs...................................................................... 1214.1.1. Lorsque l’adsorbant est le PVPP.................................................................... 1214.1.2. Lorsque l’adsorbant est l’écorce de levures ................................................... 1244.2. Etude des isothermes d’adsorption.......................................................................... 1254.3. Discussion des résultats........................................................................................... 1275. Application dans un vin .............................................................................................. 1285.1. Etude de l’adsorption de l’acide p-coumarique....................................................... 128
5.2. Etude de l’évolution de la couleur du vin lors du contact avec le PVPP ................ 1296. Conclusion générale .................................................................................................... 131Sixième Chapitre : « Etude cinétique de la bioconversion »..................... 1331. Introduction générale.................................................................................................. 1352. Fermentation d’un milieu vin synthétique (MSV) par Brettanomyces bruxellensis :reproductibilité et analyse. ......................................................................................... 1352.1. Fermentations en bain-marie................................................................................... 1352.1.1. Evolution de la biomasse................................................................................ 1352.1.2. Consommation des sucres et production d’éthanol........................................ 1362.1.3. Bioconversion................................................................................................. 1382.2. Fermentations en incubateurs.................................................................................. 1392.2.1. Evolution de la biomasse................................................................................ 1392.2.2. Bioconversion................................................................................................. 1392.3. Conclusion............................................................................................................... 1402.4. Comparaison des résultats obtenus selon les deux modes d’agitation .................... 1402.4.1. Comparaison des croissances et des sucres.................................................... 1402.4.2. Comparaison de la bioconversion .................................................................. 1412.4.3. Discussions des résultats ................................................................................ 1433. Bilan matière lors de la bioconversion ...................................................................... 1444. Etude des cinétiques de la bioconversion selon les différentes phases de croissance....................................................................................................................................... 1474.1. Profils de la bioconversion en fonction de la phase de croissance.......................... 1474.2. Calculs des vitesses de consommation de l’acide p-coumarique et de l’apparition du4-éthylphénol en fonction de la phase de croissance .............................................. 1494.3. Calculs des vitesses spécifiques de consommation de l’acide p-coumarique et del’apparition du 4-éthylphénol en fonction de la phase de croissance...................... 1514.4. Discussion des résultats........................................................................................... 1525. Etude de l’impact de la présence du 4-vinylphénol initial sur la bioconversion ... 1555.1. Utilisation du 4-vinylphénol exogène ..................................................................... 1555.2. Utilisation du 4-vinylphénol produit par saccharomyces sp. .................................. 1565.2.1. Production du 4-vinylphénol par 5 souches de Saccharomyces cerevisiae ... 1565.3. Culture séquentielle : Utilisation du 4-vinylphénol produit par Saccharomycescerevisiae................................................................................................................. 1585.3.1. Consommation du 4-vinylphénol par la levure Brettanomyces bruxellensis. 1585.3.2. Impact de la présence de 4-vinylphénol initialement sur la bioconversion del’acide p-coumarique...................................................................................... 1595.3.3. Discussion des résultats.................................................................................. 1615.4. Effet de la présence de 4-vinylphénol produit par la levure Brettanomyces........... 1615.5. Discussion des résultats........................................................................................... 1626. Etude de la bioconversion en fonction de la présence de Brettanomyces dans lemilieu ............................................................................................................................ 1636.1. Etude de la bioconversion dans le surnageant......................................................... 1636.3. Discussion des résultats........................................................................................... 165
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