12.07.2015 Views

Trousse de réactifs (liquides) Cholestérol - Pointe Scientific, Inc.

Trousse de réactifs (liquides) Cholestérol - Pointe Scientific, Inc.

Trousse de réactifs (liquides) Cholestérol - Pointe Scientific, Inc.

SHOW MORE
SHOW LESS

Create successful ePaper yourself

Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.

<strong>Trousse</strong> <strong>de</strong> <strong>réactifs</strong> (liqui<strong>de</strong>s)<strong>Cholestérol</strong>Utilisation prévuePour la détermination quantitative du cholestérol total sérique.Historique <strong>de</strong> la métho<strong>de</strong>Une métho<strong>de</strong> <strong>de</strong> dosage du cholestérol développée à la fin <strong>de</strong>s années 1800 parLieberman 1 et Burchard 2 est encore utilisée <strong>de</strong> nos jours, malgré la naturecorrosive <strong>de</strong>s <strong>réactifs</strong> et sa vulnérabilité à <strong>de</strong> nombreuses substancesinterférentes.La recherche sur une procédure enzymatique été initiée par Flegg 3 et Richmond 4au début <strong>de</strong>s années 1970. Allain 5 et Roeschlau 6 ont été les premiers à utiliser lacholestérol estérase et la cholestérol oxydase en un seul réactif pour déterminerle cholestérol total sérique.Le système <strong>de</strong> coloration <strong>de</strong> Trin<strong>de</strong>r 7 , composé <strong>de</strong> peroxydase/phénol/4-aminoantipyrine, est utilisé avec succès <strong>de</strong>puis in certain temps. Il a étédémontré que cette métho<strong>de</strong>, à l’ai<strong>de</strong> d’étalons appropriés, produit <strong>de</strong>s résultatsd’une excellente précision par rapport à la méthodologie <strong>de</strong> référence.PrincipeC. estéraseEsters <strong>de</strong> cholestérol -----------------------‣ <strong>Cholestérol</strong> + aci<strong>de</strong>s grasC. oxydase<strong>Cholestérol</strong> + O2 -------------------------‣ <strong>Cholestérol</strong>-3-one + H2O2Peroxydase2 H2O2 + 4-AAP + Phénol ------------------‣ Quinoneimine + 4 H2O(colorant rouge)L’intensité <strong>de</strong> la couleur rouge produite, mesurée à 500 nm, est directementproportionnelle au cholestérol total présent dans l’échantillon.Réactifs4-Aminoantipyrine à 0,25 mM, <strong>Cholestérol</strong> estérase > 150 u/L, <strong>Cholestérol</strong>oxydase > 150 u/L, Peroxydase > 1500 u/L, Phénol > 15 mM, Tampon phosphateà pH 6,8, stabilisants et agents <strong>de</strong> conservation non <strong>réactifs</strong>.Préparation du réactifLe réactif est prêt à l’emploi.Stockage du réactif1. Stocker le réactif entre 2 et 8 °C.2. S’il est conservé entre 2 et 8 °C, le réactif est stable jusqu’à sa date <strong>de</strong>péremption.Détérioration du réactifNe pas utiliser si :1. le réactif est trouble.2. le réactif n’est pas conforme aux paramètres <strong>de</strong> performance indiqués.Précautions1. Ce réactif est prévu pour le diagnostic in vitro uniquement.2. Ne pas utiliser par voie interne chez l’homme ou l'animal. Les précautionshabituelles <strong>de</strong> manipulation <strong>de</strong>s <strong>réactifs</strong> <strong>de</strong> laboratoire doivent êtreobservées.3. Des informations supplémentaires au sujet du stockage et <strong>de</strong> lamanipulation <strong>de</strong> ce produit sont disponibles dans sa fiche <strong>de</strong> données <strong>de</strong>sécurité.Prélèvement et stockage <strong>de</strong>s échantillonsIl est recommandé d’utiliser du sérum n’ayant pas subi d’hémolyse. Le cholestérolsérique est jugé stable pendant sept jours à température ambiante (18-25 °C) et sixmois si congelé et protégé adéquatement contre l’évaporation 8,9 .InterférencesPlusieurs médicaments et substances ont un effet sur le taux <strong>de</strong> cholestérol. VoirYoung, et al 10 .Matériels fournisRéactif pour cholestérolMatériels nécessaires mais non fournis1. Dispositifs <strong>de</strong> pipetage précis2. Minuterie3. Tubes à essais et portoirs4. Spectrophotomètre permettant <strong>de</strong> faire <strong>de</strong>s lectures à 500 nm5. Bloc chauffant (37 °C)Procédure (automatisée)Reportez-vous aux instructions propres aux applications <strong>de</strong> l’appareil.Procédure (manuelle)1. Marquez les tubes à essais : « Blanc », « Étalon », « Contrôle », « Patient », etc.2. Pipetez 1,0 ml <strong>de</strong> réactif dans chaque tube et préchauffez à 37 °C pendant aumoins cinq minutes.3. Ajoutez 0,01 ml (10 µl) d’échantillon dans chaque tube correspondant. Mélangezet remettez les tubes à 37 °C.4. <strong>Inc</strong>ubez tous les tubes à 37 °C pendant cinq minutes.5. Réglez le zéro du spectrophotomètre à 500 nm avec un blanc.6. Lisez et notez les absorbances <strong>de</strong> tous les tubes à essais.Remarques sur la procédure1. Si le spectrophotomètre utilisé nécessite un volume final <strong>de</strong> plus <strong>de</strong> 1,0 ml pourune mesure fiable, utilisez 0,025 ml (25 µl) d’échantillon pour 3,0 ml <strong>de</strong> réactif.Effectuez le test selon les instructions ci-<strong>de</strong>ssus.2. Les échantillons <strong>de</strong> sérum hautement lipémiques nécessitent l’utilisation d’un« blanc d’échantillon ». Ajoutez 0,01 ml (10 µl) <strong>de</strong> l’échantillon à 1,0 ml <strong>de</strong>solution saline, mélangez, puis mesurez l’absorbance par rapport à <strong>de</strong> l’eau.Soustrayez cette valeur <strong>de</strong> l’absorbance du patient pour obtenir la mesurecorrigée.LimitesLes échantillons dont le résultat est supérieur à 700 mg/dl doivent être dilués 1:1 avec<strong>de</strong> la solution saline et mesurés à nouveau. Le résultat final doit alors être multiplié par<strong>de</strong>ux.ÉtalonnageDes solutions étalons aqueuses ou un calibreur sérique approprié peuvent être utiliséspour étalonner la procédure. La procédure d’étalonnage doit être effectuée selon lesinstructions du fabricant <strong>de</strong> l’appareil. Si les résultats <strong>de</strong>s contrôles sont en <strong>de</strong>hors <strong>de</strong>la plage attendue, la procédure doit être calibrée à nouveau.Phone: 734-487-8300 • Toll Free: 800-445-9853 • Fax: 734-483-1592 • www.pointescientific.com


<strong>Trousse</strong> <strong>de</strong> <strong>réactifs</strong> (liqui<strong>de</strong>s)<strong>Cholestérol</strong>CalculAbs. = AbsorbanceAbs. (Patient) x Concentration étalon = <strong>Cholestérol</strong> (mg/dl)Abs. (étalon) (mg/dl)Par exemple : Abs. (Patient) = 0,40 ; Abs. (étalon) = 0,32 ; Concentration <strong>de</strong>l’étalon = 200 mg/dl0,40 x 200 = 250 mg/dl0,32Contrôle <strong>de</strong> qualitéDes échantillons <strong>de</strong> sérum <strong>de</strong> contrôle présentant <strong>de</strong>s quantités connuesnormales et élevées doivent être mesurés régulièrement pour évaluer la validité<strong>de</strong> la réaction. Ces contrôles doivent être testés aux moins une fois pour chaquepério<strong>de</strong> <strong>de</strong> travail au cours <strong>de</strong> laquelle <strong>de</strong>s tests du cholestérol sont effectués.Nous recommandons à chaque laboratoire d’établir sa propre fréquence <strong>de</strong>mesure <strong>de</strong>s contrôles.Fabriqué par <strong>Pointe</strong> <strong>Scientific</strong>, <strong>Inc</strong>.5449 Research Drive, Canton,MI 48188, États-UnisReprésentant européen agréé :Obelis s.a.Boulevard Général Wahis 531030 Bruxelles, BELGIQUETél : (32) 2-732-59-54 Fax : (32) 2-732-60-03 E-mail : mail@obelis.netValeurs attendues 11Plage recommandée :Niveau <strong>de</strong> cholestérol souhaité :Niveau limite <strong>de</strong> cholestérol :Niveau élevé <strong>de</strong> cholestérol :< 200 mg/dl200-239 mg/dl> 240 mg/dlPerformances1. Linéarité : 700 mg/dl2. Comparaison : une comparaison entre cette métho<strong>de</strong> et un <strong>réactifs</strong>emblable en poudre a donné une équation <strong>de</strong> régression <strong>de</strong> y = 1,02 x +0,8 et un coefficient <strong>de</strong> corrélation <strong>de</strong> 0,999.3. Précision :À l'intérieur <strong>de</strong> d’une série D’une série à l’autreMoyenne É.T. % C.V. Moyenne É.T. % C.V.157 1,1 0,7 155 1,3 0,8224 1,7 0,8 227 2,4 1,14. Spécificité : La cholestérol oxydase n’est pas entièrement spécifique pour lecholestérol. D’autres analogues du cholestérol (dihydrocholestérol, 7-déhydrocholestérol, 20-hydroxycholestérol, etc.) sont également oxydés.Toutefois, les concentrations <strong>de</strong> ces analogues dans le sérum sontnormalement négligeables.References1. Lieberman, C., Ber. 18:1803 (1885).2. Burchard, H., Chem. Fentr. 61:25 (1890).3. Flegg, H.M., Ann. Clin. Biochem. 10:79 (1973).4. Richmond, W., Scand. J. Clin. Lab. Invest. 29:Suppl. 26, abstr. 3:25 (1972).5. Allain, C.C., et al, Clin. Chem. 20:470 (1974).6. Roeschlau, P., et al, Z. Klin. Chem. Klin. Biochem 12:226 (1974).7. Trin<strong>de</strong>r, P., Ann. Clin. Biochem. 6:24 (1969).8. Perlstein, M.T., et al, J. Microchem. 22:403 (1977).9. Witte, D.L., et al, Clin. Chem. 20:1282 (1974).10. Young, D.S. et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).11. National Institute of Health Publication No. 88-2926 “Detection, Evaluation,and Treatment of High Cholesterol in Adults”, November (1987).Rév. 11/11 P803-C7510-01-FR

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!