THÈSE

- 21 -que le poids moléculaire de l'antigène est plus élevé. Sice poids molêculaire se situe en-dessous de 1000-5000, ildevient très difficile d'obtenir des anticorps, à moins decoupler l'antigène appelé alors haptène~à une grossemolêcule telle que l'albumine bovine ou la thyroglobuline,utilisée pour l'obtention d'anticorps anti-stéroides. Lesméthodes d'immunisation sont restées jusqu'à présent fortempiriques. Il existe presque autant de méthodes qued'investigateurs, chacun ayant recours à son animal (lapins,hamsters, rats, moutons, chèvres, singes), à sa voied'administration (intradermique, intramusculaire, souscutanée),sonadjuvant, sa dose, son schéma d'administrationetc•.• Les animaux sont immunisés par groupe de trois, àcause des différences individuelles de réponse à la tentatived'immunisation. Il n'y a apparemment pas de différenceliée au sexe dans la réponse immunitaire, même pour lesstéroïdes sexuels (ROBYN et coll., 1974).La méthode d'immunisation que nous avons retenueest la suivante: la quantité d'antigène varie de 100 ;ug à3 mg suivant le dégré de pureté de la préparation utilisée.Elle est dissoute dans 1,0 ml de sérum physiologique parlapin, et émulsionnée ensuite dans un volume identiqued'adjuvant complet de Freund (Difco Laboratories Détroit,MICHIGAN). Chaque lapin reçoit sa dose du mélange ainsiobtenu, par injection sous-cutanée en quatre sites paravertébraux(4 x 0,5 ml). Trois injections sont pratiquéesà trois semaines d'intervalle chacune. Dix à quinze joursaprès la troisième injection, 40 à 50 ml de sang sontrecueillis par saignée au niveau de la veine marginale del'oreille. Après coagulation, le sérum est séparé ducaillot par centrifugation et conservé à -20 0 C. Sinécessaire, des injections de rappel sont pratiquéessuivant la même technique tous les 2 ou 3 mois. Le sérumde chaque animal et de chaque saignée est conservé