Implication des protéines vitamine K-dépendantes dans la ...

3.2 Implication du facteur anticoagulant, protéine S, et de son homoloque structural Gas6
dans la croissance des cultures de CSN issues de la SVZ du cerveau de rongeurs post-natals
le co-marquage avec le récepteur Axl). Les noyaux sont marqués par du Topro-3 (en bleu).
Barre d’échelle : 25 µm.
Nos résultats de RT-PCR et de Western blot montrent que les trois récepteurs de la
famille TAM sont exprimés par les cellules de la SVZ in vitro (Figure 30a et b). Par
immunocytochimie, nous montrons que les cellules de type glial, de type neuronal et les
cellules immatures expriment les récepteurs Mer et Tyro3. Le récepteur Axl est exprimé par
les cellules de type neuronal, dans certaines cellules gliales et rarement par les cellules
immatures (Figure 30c).
L’immunomarquage sur les cellules de la SVZ révèle également la présence d’Axl au
niveau du fuseau mitotique, de ses pôles (Figure 31a) ainsi qu’au point de cytodiérèse
(Figure 31b). Ces observations ont été faites dans des cellules gliales (GFAP positives), des
cellules du lignage neuronal (βIII-tubuline positives) mais aussi dans des cellules immatures
(Nestine positives). La protéine Axl est un récepteur tyrosine kinase localisé normalement à la
membrane plasmique. Cette localisation abérrante devra faire l’objet d’études ultérieures.
Figure 31 : Localisation atypique du récepteur Axl dans les CSN. Détection par
immunocytochimie du récepteur Axl (en vert) ainsi que de la GFAP ou de la βIII-tubuline (en
rouge) au niveau (a) du fuseau mitotique et (b) au point de cytodiérèse. Les noyaux sont
marqués par du Topro-3 (en bleu). Barre d’échelle : 25 µm.
Dans un second temps, nous avons vérifié l’activation potentielle des récepteurs TAM
par leur ligand. Pour cela les cellules de la SVZ ont été traitées avec la protéine Gas6 ou la
protéine S à 140 nM pendant 10 minutes (Figure 32). Nous observons une activation par
phosphorylation du récepteur Tyro3 en présence de la protéine S seule ou supplémentée de la
protéine Gas6 par rapport aux conditions contrôles. La protéine Gas6 active le récepteur Axl,
cette activation est inhibée en présence de la protéine S (Figure 32). Dans nos conditions
expérimentales, l’activation du récepteur Mer n’a pas été observée.
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