Implication des protéines vitamine K-dépendantes dans la ...

3.2 Implication du facteur anticoagulant, protéine S, et de son homoloque structural Gas6
dans la croissance des cultures de CSN issues de la SVZ du cerveau de rongeurs post-natals
Nos résultats montrent que les cellules de la SVZ expriment les ARNm de la protéine
Gas6 et de la protéine S (Figure 26a), de la MGP et de la BGP (Figure 26b), de certaines
connexines (Figure 26c) ainsi que de la périostine (Figure 26d). Comme attendu, les CSN
n’expriment aucune PVKDs impliquées dans la cascade de coagulation (Figure 26a).
L’expression des PVKDs transmembranaires et de la protéine Z n’ont pas été recherchées car
leurs séquences ne sont actuellement pas clonées chez le rat.
Nous avons recherché dans des milieux conditionnés par les CSN le profil
d’expression de l’ensemble des PVKDs sécrétées par Western blot en utilisant des anticorps
dirigés spécifiquement contre les résidus d’acide γ-carboxyglutamique.
Notre expérience révèle que les cellules de la SVZ produisent une ou des PVKD(s)
d’un poids moléculaire apparent de 80 kDa (Figure 18b). Deux PVKDs ont un poids
moléculaire proche de 80 kDa : la protéine Gas6 et la protéine S. Nous avons alors recherché
la présence par Western blot de ces deux protéines dans le milieu conditionné par les cellules
souches en utilisant des anticorps spécifiquement dirigés contre ces protéines. Pour cela les
milieux conditionnés ont été précipités au citrate de barium. Nos résultats montrent que ces
deux protéines sont sécrétées par les CSN en conditions basales (Figue 27a et b). Lorsque les
cellules sont traitées avec de la vitamine K1, nous observons une augmentation de la sécrétion
de la protéine Gas6 dans les milieux conditionnés (MC) par rapport aux conditions contrôles
ainsi qu’une diminution de sa concentration dans les lysats cellulaires (LC) (Figure 27c). A
l’inverse lorsque les cellules sont traitées avec de la warfarine, la protéine Gas6 s’accumule au
niveau intracellulaire et sa sécrétion diminue (Figure 27c). Nous n’avons pas pu reproduire
cette expérience avec la protéine S, cette dernière étant faiblement sécrétée en conditions
basales. Effet le milieu conditionné a été concentré 100 fois après précipitation au citrate de
barium pour permettre sa détection. De plus, par double-immunomarquage, nous montrons
que la protéine Gas6 et la protéine S sont exprimées par les cellules de type glial (cellules
GFAP positives), de type neuronal (cellules βIII-tubulines positives) et par des cellules
immatures (cellules Nestine positives) (Figure 27d).
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