Implication des protéines vitamine K-dépendantes dans la ...

3.1 L’inhibition de la sécrétion des PVKDs stimule la prolifération des CSN issues de la SVZ
du cerveau de rongeurs post-natals in vitro et in vivo
L’influence des PVKDs sur la morphologie et le nombre des cellules de la SVZ in
vitro a alors été étudiée en maintenant les cultures pendant 5 jours en présence de 1 µg.ml -1 de
S-warfarine. Nous avons observé, dans un premier temps, un changement drastique de la
morphologie des cellules en présence de warfarine par rapport à une condition contrôle
(Figure 18d). Les cellules sont plus rondes et les neurosphères plus grosses en présence de ce
traitement. Nous avons observé, dans un second temps, l’effet de l’inhibition de la sécrétion
des PVKDs par la warfarine sur des CSN provenant de rats ou de souris nouveau-nés et
adultes. Cette expérience a été réalisée sur des cellules provenant de différentes espèces à
différents âges car des études précédentes ont démontré des variations de la réponse cellulaire
à certains facteurs selon l’espèce et l’âge des animaux dont les cellules sont issues (Baker et
al., 2005; Van Kampen et al., 2004). Nos résultats montrent que l’inhibition de la sécrétion
des PVKDs par la warfarine induit in vitro une augmentation du nombre de CSN provenant
de rats ou de souris nouveau-nés et adultes (Figure 18e). L’effet de l’inhibition de la sécrétion
des PVKDs sur les CSN est donc indépendant de l’âge et de l’espèce des animaux dont elles
dérivent.
L’ensemble de ces résultats montre donc qu’une ou plusieurs PVKD(s) régule(nt) la
croissance des CSN. La suite des expériences in vitro sera réalisée sur des CSN issues de la
SVZ de rats nouveau-nés.
3.1.1.2 L’inhibition de la sécrétion des PVKDs stimule la croissance des cellules
de la SVZ de façon dose-dépendante
Nous avons alors recherché si l’effet de la warfarine est dose-dépendant. Pour cela, les
CSN sont traitées avec des concentrations croissantes allant de 1 à 500 µg.ml -1 de S/Rwarfarine
pendant 5 jours. Les résultats obtenus montrent que la S/R-warfarine stimule la
croissance des CSN à des concentrations de 100 et 500 µg.ml -1 (Figure 19a). Ces
concentrations sont relativement élevées en comparaison à celles utilisées pour d’autres types
cellulaires (Wu et al., 1997; Zhang and Suttie, 1994). Nous avons testé de la même façon
l’isoforme S de la warfarine. Cette isoforme est connue pour avoir une action plus puissante
que l’isoforme R et donc que le mélange racémique à des concentrations similaires (Choonara
et al., 1986; Gage and Milligan, 2005). Nos résultats montrent que la S-warfarine stimule la
croissance, de façon significative, à des doses de 1 et 10 µg.ml -1 (Figure 19b). Pour
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