Implication des protéines vitamine K-dépendantes dans la ...

RÉSULTATS et DISCUSSIONS
3.1 L’inhibition de la sécrétion des PVKDs stimule la prolifération des
cellules souches neurales issues de la SVZ du cerveau de rongeurs post-
natals in vitro et in vivo
L’objectif de ce travail a été de mettre en évidence le rôle des protéines vitamine-K
dépendantes sur la prolifération et la différenciation des cellules souches neurales issues de la
zone sous-ventriculaire du cerveau de rats nouveaux-nés in vitro et in vivo. Pour cela, nous
avons mis au point un modèle expérimental qui consiste à moduler la sécrétion de l’ensemble
des PVKDs. L’utilisation de la warfarine nous a permis d’inhiber la sécrétion des PVKDs par
les CSN (Wallin and Hutson, 2004), alors que l’ajout de vitamine K1 a au contraire permis de
stimuler leur production. Cette étude in vitro a été complétée par une étude in vivo qui a
consisté en l’injection intracérébroventriculaire de warfarine dans le ventricule latéral de
souris adultes.
3.1.1 Effet des PVKDs sur la prolifération des CSN in vitro
3.1.1.1 Expression et fonctionnalité du système de γ-carboxylation
Dans un premier temps, nous avons étudié, par RT-PCR, la présence des acteurs
majeurs du complexe enzymatique permettant la réaction de γ-carboxylation dans les cellules
de la SVZ de rats nouveau-nés. Cette analyse montre que les CSN expriment l’ARNm de la γcarboxylase,
de la VKOR ainsi que de la caluménine (Figure 18a). Ces cellules expriment
donc la machinerie enzymatique nécessaire à la γ-carboxylation des protéines vitamine Kdépendantes.
Afin de vérifier la fonctionnalité du système de γ-carboxylation et donc de la sécrétion
des PVKDs par les CSN, les cellules ont été cultivées pendant 5 jours en conditions basales
ou en présence de S-warfarine à 1 µg.ml -1 ou de vitamine K1 à 10 µg.ml -1 . Nous avons
ensuite détecté dans le milieu conditionné par les CSN l’ensemble des PVKDs par Western
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