Implication des protéines vitamine K-dépendantes dans la ...

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3. Résultats et discussions………………………………………………………………….p75 3.1 L'inhibition de la sécrétion des PVKDs stimule la prolifération des CSN issues de la SVZ du cerveau de rongeurs post-natals in vitro et in vivo............................................................ p75 3.1.1 Effet des PVKDs sur la polifération des CSN in vitro............................................ p75 3.1.2 L’inhibition de la sécrétion des PVKDs stimule la prolifération des cellules progénitrices in vitro ........................................................................................................ p81 3.1.3 L’inhibition de la sécrétion des PVKDs stimule la prolifération des cellules de la SVZ in vivo....................................................................................................................... p83 3.2 Implication du facteur anticoagulant, protéine S, et de son homologue structural Gas6 dans la croissance des cultures de CSN issues de la SVZ du cerveau de rongeurs post-natalS ................................................................................................................................................ p86 3.2.1 La protéine Gas6 et la protéine S sont les seules PVKDs produites par les cellules de la SVZ in vitro.................................................................................................................. p87 3.2.2 La protéine Gas6 et la protéine S sont exprimées in vivo par les cellules de la SVZ .......................................................................................................................................... p90 3.2.3 La protéine Gas6 est produite par des cultures de plexus choroïdes in vitro et est présente dans le LCR de rongeurs.................................................................................... p91 3.2.4 Expression et activation des récepteurs TAM dans les CSN .................................. p92 3.2.5 La protéine S inhibe la croissance des cellules de la SVZ et réverse l’effet stimulateur de la warfarine in vitro .................................................................................. p95 3.2.6 La protéine Gas6 stimule l’autorenouvellement des cellules de la SVZ in vitro.... p96 3.2.7 La protéine Gas6 stimule la prolifération des cellules de type souche in vivo........ p97 3.3 Discussion ........................................................................................................................ p98 3.4 Capacité des cellules souches neurales à phagocyter : implication de la protéine S ..... p104 3.4.1 Les cultures de cellule issues de la SVZ sont capables de phagocytose in vitro .. p105 3.4.2 La protéine S stimule la phagocytose de billes de latex par les cellules de la SVZ ........................................................................................................................................ p107 3.4.3 Discussion ............................................................................................................. p110 3.5 Implication de la protéine Gas6 dans la rétinogenèse .................................................... p114 3.5.1 La protéine Gas6 semble nécessaire à la prolifération des cellules suite à une lésion de la rétine induite par un impact laser. .........................................................................P114 3.5.2 Effet de la protéine Gas6 sur l’apoptose des cellules suite à une lésion de la rétine induite par impact laser. .................................................................................................P116 3.5.2 Discussion ............................................................................................................. p117 4. Conclusions et perspectives ...........................................................................................p119 5. Bibliographie...................................................................................................................p123 6. Annexes ...........................................................................................................................p141 5
AVANT-PROPOS La coagulation du sang est un processus complexe dont les acteurs majeurs sont les protéines vitamine K-dépendantes (PVKDs). Cette famille de protéines a fait l’objet d’un grand nombre d’études ces dernières années, montrant leur implication, pour certaines d’entre elles, dans une grande variété de processus dont la prolifération, la survie et la différenciation cellulaires. La première partie de ma thèse consiste en une étude bibliographique qui porte sur l’ensemble des PVKDs, puis plus spécifiquement sur deux d’entre elles : la protéine Gas6 et la protéine S qui ont la particularité, contrairement aux autres PVKDs, d’activer des récepteurs tyrosine kinase. Lors de cette partie introductive je détaillerai également nos deux modèles d’études, les cellules souches neurales (CSN) issues de la zone sous-ventriculaire (SVZ) du cerveau et la rétine. La SVZ et l’hippocampe sont les deux sites encore dotés de neurogenèse chez les mammifères adultes. L’élucidation des mécanismes régulant la prolifération des CSN de la SVZ est d’une importance capitale aussi bien d’un point de vu fondamental que clinique pour le traitement des maladies neurodégénératives. Le premier objectif de ma thèse a été d’étudier l’effet des PVKDs sur la prolifération et la différenciation des CSN issues de la SVZ du cerveau de rongeurs. Pour cela, nous avons développé un modèle expérimental basé sur la suppression de la production des PVKDs par l’utilisation de la warfarine. En effet, la warfarine est un antagoniste de la vitamine K qui inhibe la γ-carboxylation et donc la production des PVKDs. La deuxième partie de cette étude porte sur la caractérisation du profil d’expression des PVKDs ainsi que sur leurs effets sur les CSN. Les PVKDs sont également impliquées dans la phagocytose, processus indispensable au développement et à l’intégrité du système nerveux central. C’est pourquoi une partie de ce travail est dédiée au potentiel de phagocytose des CSN et à sa modulation par certaines PVKDs. Enfin, la dernière partie de ce manuscrit concerne l’implication d’une PVKD, la protéine Gas6, dans la physiopathologie rétinienne. L’ensemble de ces investigations est présenté dans la partie Résultats de ma thèse où elles seront également discutées. Enfin, dans la dernière partie de ce manuscrit, je concluerai cette étude et en exposerai les perspectives potentielles. 6
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