Implication des protéines vitamine K-dépendantes dans la ...

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CHAP 3-RÉSULTATS et DISCUSSIONS
3.4 Capacité des cellules souches neurales à phagocyter :
implication de la protéine S
Il est admis que la phagocytose est un mécanisme important pour le développement et
l’intégrité du SNC. La microglie est le phagocyte prédominant du SNC (Pour revue (Mallat et
al., 2005; Neumann et al., 2009)), des études montrent également que les oligodendrocytes
ainsi que les neurones ont la capacité de phagocyter (Bowen et al., 2007; Pender and Rist,
2001).
Les récepteurs TAM ainsi que leurs ligands sont impliqués dans la phagocytose (Hall
et al., 2005; Seitz et al., 2007; Xiong et al., 2008). En effet, les souris dont les gènes pour les
récepteurs TAM ont été invalidés présentent des anomalies phénotypiques dont le
dénominateur commun est un déficit de la phagocytose (Tableau II). La protéine Gas6 tout
comme la protéine S sont qualifiées d’opsonines c'est-à-dire qu’elles créent un pont protéique
entre un phagocyte et une entité à phagocyter (Wu et al., 2005; Wu et al., 2006). Dans cette
partie du travail, nous avons cherché le potentiel et les mécanismes moléculaires de
phagocytose des cellules issues de la SVZ.
Dans un premier temps, en nous appuyant expérimentalement sur les travaux de
Bowen et collaborateurs, qui ont mis en évidence la capacité de certaines populations de
neurones à phagocyter (Bowen et al., 2007), nous avons mis au point un test de phagocytose
en utilisant des billes de latex chargées négativement de 1 µm de diamètre conjuguées à un
fluorochrome (FITC). La taille de 1 µm a été choisie car le mécanisme d’internalisation est
qualifié de phagocytose lorsque la taille de l’élément à ingérer est supérieur à 0,5 µm (Bowen
et al., 2007). De plus, ces billes sont chargées négativement à leur surface afin de reproduire
l’état des membranes plasmiques d’une cellule à phagocyter. Enfin, la fluorescence de ces
billes a deux avantages : dans un premier temps, elle nous permettra de les visualiser
directement en microscopie confocale et de suivre ainsi leur internalisation et dans un second
temps, elle nous permettra de quantifier cette internalisation par cytométrie en flux.