L'activité antagoniste des bactéries lactiques (Streptococcus ...

76L’activité antagoniste des bactéries lactiques37°CFigure n° 04 : Culture de Streptococcusthermophilus sur le milieu M17 agar.Figure n° 05 : Culture de Lactobacillus bulgaricussur le milieu MRS agar.Figure n° 06 : Aspect macroscopique des colonies deBifidobactérium bifidum sur milieu MRS –Cyst.Les résultats de la diminution du pH par lesbactéries lactiques : La mesure des pH initial et finalmontre une diminution du pH dans le milieu contenant lessouches lactiques isolées. Cette diminution est indiquéedans le tableau n° 4 .Tableau n°04 :Diminution du pH par les deux souches lactiques cultivées dans lebouillon approprié (MRS ou M17 liquide) pendant 48 h à 37°C.SoucheInitialLactique pH Tauxd’acidité° DorningpHFinalTauxd’acidité° DorningSc. thermophilus 7,50 24 4,95 49Lb. bulgaricus 7,13 27 4,92 50Bf.bifidum 7,23 25 4,55 473.3. Test de l’antagonismeRecherche des inhibitions : s résultats de l’interactionobtenue révèlent la présence de zones claires au tour dessouches d’Helicobacter pylori ensemencée en touches.Ces résultats indiquent l’existence d’agentsd’inhibitions produits par les bactéries lactiques etindiquent la nature de ces agents.. Les résultats de l’antagonisme sont indiqués dans letableau n° 05, Figure n°07 et Figure n°08. En observantce tableau, on remarque que les trois bactéries lactiquesont inhibées la croissance d’Helicobacter pylori parl‘activité d’antagonisme, et on remarque aussi que H.pylori a été la plus sensible à Bf.bifidum qui se traduit parun diamètre d’inhibition minimale de 8 mm

Revue « Nature & Technologie ». n° 06/Janvier 2012 77Tableau n ° 05 :Résultats de l’antagonisme de H. pyloriSouche B. bifidum L. blgaricus Sc. ThermophilusH.pylori + + +DMI (mm) 08 05 03+ : Présence d’haloBf.bifidumL. blgaricusSc. ThermophilusFigure n° 07 : Résultats de l’antagonismefigure n° 08 : Résultats de l’antagonismeH. pylori avec les trois bactéries lactiques pylori avec Bf.bifidum.pylori. Les résultats sont traduits par une courbe quiRecherche de bactériocines : Après une incubation à montre une décroissance de la bactérie Helicobacter37°C pendant 20 heures en micro aérobiose, la croissance pylori une fois on ajoute le surnageant. Ces résultatsbactérienne est suivie par la mesure de la densité optique. s’expliquent par la présence de bactériocines like produiteNous avons calculé la croissance bactérienne à l’aide des par Bifidobacteruim bifidum. (Figure n° 09).valeurs de la densité DO) afin de connaître l’existence debactériocine et son effet sur la croissance d’Helicobacter.(DO)0,90,80,70,60,50,40,30,20,11Temps0 2 4 6 8 16 (Heures)Figure n° 09 : la croissance de H.pylori en présence de bactériocine like produit Bf.bifidum01 ml du surnageantH.pylori + 1 ml du surnageantH.pylori

784. Discussion des résultats4.1. Isolement et identification des souches de H.pyloriA partir des biopsies gastriques des malades,nous avons pu isoler trois souches d’Helicobacterpylori. Après cinq jours d’incubation, des coloniestransparentes, luisantes, visqueuses et finesappariassent sue la gélose colombia et aussi sur lagélose chocolatée, avec un diamètre de 1 mm. Cescaractères culturaux correspondent à Helicobacterpylori [5].L’observation microscopique sous fortgrossissement × 100 a montré que H.pylori est unpetit bacille de forme incurvé, mobile qui jouent unrôle important dans la colonisation de l’estomac[13]. La coloration de Gram montre qu’il agit d’unebactérie à caractère Gram négatif.Les résultats biochimiques obtenus montrent quecette bactérie possède une uréase, une catalase etune oxydase positives, et donc une activitéenzymatique importante. Ils montrent aussi quecette bactérie utilise les citrates comme sources decarbones et n’utilise pas les substrats sucrés commesources de carbones. [34]. L’étude de la sensibilitéde H. pylori aux antibiotiques a montré d’excellentsrésultats par rapport à l’activité de la plupart desantibiotiques utilisés. Nos résultats ont montré queles trois souches isolées d’H.pylori sont sensibles àla Pénicilline, Gentamycine, l’Amoxicilline,l’Erythromycine, au Chloramphénicol, laTetracyline.En revanche, les 3 souches de H. pylori montrentune résistance remarquable vis-à-vis auxantibiotiques commelala Trimethoprine et les Sulfamides.Une résistance au Metronidazole et autobramycine, a été observé chez la souche Hp3 etHp2.Donc il est important dans toute infection detester la sensibilité de la souche H. pylori vis-à-visde ses antibiotiques pour justifier leurs utilisationsdans le domaine thérapeutiques [8] [10] [15] [7].4.2. Confirmation des bactéries lactiquesD’après les études morphologiques,physiologiques et biochimiques des soucheslactiques, on a constaté que : La souche Sc. thermophilus cultivée sur lemilieu M17 solide donne des colonies rondes oulenticulaires de couleur blanche crème. L’étudemicroscopique d’un frottis fixé et coloré à partirdes colonies précédentes montre que cette bactérieest sous forme de coques Gram positif (+) groupésen paires ou en chaines.L’activité antagoniste des bactéries lactiques La souche Lb. bulgaricus ensemencée sur lemilieu MRS solide donne des petites coloniesidentiques de couleur blanche crème. L’observationmicroscopique de ces colonies révèle que cettebactérie est sous forme de bacilles Gram positif (+)groupées en paires ou en chaines. Nous avons remarqué que les colonies B.bifidum développée sur milieu MRS solide sontblanchâtres, lisses avec un contour régulier.L’étude microscopique d’un frottis fixé et coloré àpartir des colonies de Bifidobactérium bifidummontre des bacilles incurvés à contours régulierssouvent ondulés, avec une extrémité bifurque ouspatulée. Notre étude a montré également qu’il a unpolymorphisme cellulaire [9] [11] [25] [32].4.3. Interaction bactériennes :L’abaissement du pH dans les milieux MRS etM17 liquides signifie que chacune des deuxsouches lactique possède un effet acidifiant, enproduisant des acides organiques, les principauxfacteurs d’inhibition [3] [17] [33].La comparaisonentre les résultats du pH et celui de l’acidité montreque le taux d’acidité augmente avec la diminutiondu pH. La production d’acides organiques à poureffet l’inhibition de la croissance des souches deHelicobacter pylori qui ne peut pas survivre à pHbas [20] [37].Les résultats concernant les tests del’antagonisme révèlent l’inhibition de Helicobacterpylori par les bactéries lactiques. Bf.bifidum inhibeles souches de H.pylori avec une zone d’inhibitiond’un diamètre minimal d’inhibition de 08 mm pourLb. Bulgaricus cette zone est de 05 mm et pour Sc.Thermophilus elle est de 03 mm. [22].Les résultats du test de l’antagonisme nous apermis La recherche des agents d’inhibition chez legenre B. bifidum [12].Ces substances ont été caractérisées par d’autreschercheurs comme étant des molécules de natureprotéique [19], B. bifidum peut naturellementproduire plus qu’un bactériocine.Des résultats similaires ont été trouvés par [14] quiconfirment la présence de bactériocine inhibitricede H. pylori.Références bibliographiques[1] Abderahmane, H. (2004). Etude de la croissance desBifidobactéries et ses interactions avec les souches pathogènes.Mémoire de DES, Université d’Oran Es-Senia. Pp : 18-21.[2] Achemchem. F et ABRINI. J (2005) : Production deBactériocines par des bactéries lactiques isolées à partir du jbende chèvre du nord du Maroc. Tétouan, Maroc. Pp : 170-182. [3]Ait abdelouahab. N (2001) : Microbiologie alimentaire. Officedes publications universitaires, Alger. P : 23.[4] Asperger. H. (1985). Produit laitiers fermentés : exemplesd’interaction de microorganismes. OsterreichicheMilchwirtschaft. Pp 19 : 15-31.[5] Avril JL, Dabernat H, Denis F, Monteh H. (1995)Bacteriologie clinique 2eme édition Pp 25 : 293-295.[6] Ballongue, (1993). In lactic acid bacteria salminems,andvonwrignt, Aliment pharmacol ther; Pp 3: 145-147.

Revue « Nature & Technologie ». n° 06/Janvier 2012 79[7] Bardhan K, Bayerdorffer E, Veldhuyzen Van Zanten SJ,Lind T, MégraudF, Delchier. JC, Hellblom M, Stubberod A,Burman CF, Gromark P, Zeijlon L. (2000). The homer Study:the effect of increasing the dose of metronidazole whengivenwith omeprazole and amoxicillin to cure Helicobacter pyloriinfection. Helicobacter Pp 5:196-201[8] Bell GD, Powell KU, Burridge SM, Rameh B, Bolton G,Purser K. (1993). Helicobacter pylori eradication efficacy andside effect profile of a combination of omeprazole, amoxicillinand metronidazole compared with 3 différent forms of bismuthcontaining triple therapy. Q J Med Pp 86 : 743-50.[9] Bensoltane, A ; Ben âma, R ; Hadadji, M ; Kihal, M. (1997).Etude bibliographique sur la caractérisation de Bifidobactérium,sp animales, l’université d’oran. P: 31.[10] Bigard MA, Delchier JC, Riachi G, Thibault P,Barthelemy P. (1995) One-week triple therapy usingomeprazole, amoxycillin and clarithromycin for the eradicationof Helicobacter pylori in patients with non-ulcer dyspepsia:influence of dosage of omeprazole and clarithromycin. AlimentPharmacolTher; 12: 383-388.[11] Bonaprite, G H ; Gunter, K ; Wolf gang, K ; Gerhard, R.(2001). Développement d’un milieu selectif pour le de nomBrement des bifidobacteries dans le lait fermentés.[12] Bouvier,M ; grimand, J.C ; Marteau, p. (1994). Effects ofbifidobacteria fermented mild bio strain or the colonic transitetime in healthy humains. Actes du colloque lactique , France,presses university de canne, p : 406.[13] Brenner H, Bode G, Boeing H. (2000). Helicobacter pyloriamong offspring of patients with stomach cancer.Gastroenterology Pp118 : 31-5.[14] Carmen, M ; Jan Kok, EH ; Pelaez, C ; requena, T et BuistG. (2000). Applied and Environmental Microbiologie, Aug., Pp:3174-3179.[15] Cayla R, Lamouliatte H, Mégraud F. (1996). Quinton A.Primarry resistance of Helicobacter pylori strain tometronidazole and to clarithromycin in France in 1995.Gastroenterology. 45:106-2501.[16] Cayla R. (1996). Comment éradiquer Helicobacter pylori ?gastroenterol.Clin. Biol. Pp 20 : 119-130.[17] Choisy.c, m. Desmazeaud, m. Gueguen, j. Lenoir, j-l.Schmidt etc.Tourneur. (1997). Les phénomènesmicrobiens Chapitre 10 In Le fromage 3 ème édition, Tec & Doc,édition Lavoisier. Pp : (381-429).[18] Delarras Camille. (2007). Microbiologie pratique pour lelaboratoire d’analyse ou de contrôle sanitaire. Edition Lavoisier.P : 128, 129, 269, 271.[19] Delvis-Broughton. J. (1990). Nisine an dits uses afood preservative. Food Technol. Pp 44: 100-117.[20] Desmazeaud.M. (1998). Bactéries lactiques et qualité desfromages. Laboratoire de recherches laitières. INRA, France.[21] Desmazeaud.M. (1997). Le lait de fromage In Le Fromage3ème édition, Tec& Doc, édition Lavoisier. P 214.[22]Devuyest, L ; Vandamme, E.J. (1994) Bacteriocines oflatic acid bacterie London: academic andprofessional.pp.91-146.[23] GUIRAUD J.P (1998) : Microbiologie alimentaire,DUNOD, Paris. P : 80, 84, 116, 282,283, 291.[24] Fauchèr J.L., et Rosenau A., (1991). Campylobacter etHeliobacter en pathologie digestive humaine. Médecine/Sciences. 7 : 138-152.[25] Hadadji, M; A. Bensoltane, (2006). Growth and lactic acidproduction by Bifidobacterium longum and Lactobacillusacidophilus in goat’s milk. AJB Vol. 5(6), pp. 505-509.[26] Kleanhammer. T.R., (1986). Bacterionines of lacticacid bacteria. Biochimie , 70 : 337-349.[27] Labioui. H, Elmoualdi. L, El yachioui. M, Ouhssine.M(2005) : Sélection de souches de bactéries lactiquesantibactériennes. Bull. Sac. Pharm. Bardeaux. Pp : 237-250.[28] Lamouliatte H., Mégrand F., et Cayla R., (1992)Helicobacter pylori et pathologie gastroduodénale. EncyclopédieMédico-chirurgicale. Editions techniques. EMC.[29] Larpent. M, Michaux.O, Larpent. J-p, Desmasures. N,Desmazeaud. M, Mangin.I, Masson.f, Montel.m-c,Tailliez.p (1997) : Microbiologie alimentaire : techniques delaboratoire. Tec & Doc, édition Lavoisier. Pp : 199-229.[30] Leveau J.Y et Bouix Marielle (1980) : technique d’analyseet de contrôle dans les industries agro-alimentaires. 3emeédition. Tec & Doc, Lavoisier. Paris ; P 106.193.[31] Lozniewski, A. (1996). Méthodes diagnostiques del’infection de Helicobacter pylori.Gastroenterol. Clin. Biol. 20:111-11[32] Mahi M., a. Yagoubi, l. Rouissat, S.Tabak ,l. Medouakhand A. Bensoltane (2006) growth, viability and acidifyingactivity of bifidobacteria in goat’s milk. In prese.[33] Mathot. A.G, Beliard. E, Thuault. D (1996) : Propriétésantimicrobiennes des bactéries lactiques In microbiologiealimentaire tome 2, aliments fermentés et fermentationalimentaire. Tec & Doc, édition Lavoisier. Pp : 432-447.[34] Medouakh, L.; S. Tabak ; A. Benkada ; M. Mahi ; L.Rouissat; A. Yagoubi and A. Bensoltane. (2006). Isolation andcharacterization of Helicobacter pylori from patients sufferingfrom gastroduodenal ulcer disease. In presse.[35] Mégraud, F. (1994). Méthodes diagnostiques directes etindirectes de Helicobacter pylori. Gastroenterol. Clin. Biol. 18:217-222.[36] Mégraud .F (2004) Méthode diagnostic directe et indirected’Helicobacter-pylori .Centre national de référence desCampylobacters et Helicobacters ; Bordeaux[37] Sheu, C.W ; Konings, w., N ;freese,E (1992) Effectsof acetate and other short. Chain fatty acids on sugar andamino acid up take of Bacillus subtilis.G. bacteriol . lll :525-530[38] Sobhani I, Wyatt JI. (2000) Histopathology of gastroduodenal inflamation : the impact of Helicobacter pylori.Histopathology. 26:1-15.[39] Riachi, G. and R. colin (1995). Helicobacter pylori.Méthodes de recherche. Impact. Med. Les dossiers du praticien.303: 1-22.[40] Tabak, S. (2007) : Interactions entre Helicobacter pyloriresponsable de maladies gastroduodénales et Bifidobacteries.Mémoire de magister, Université d’Oran.