Immunohistochimie et immunocytochimie dans les ... - AFAQAP

Carrefour Pathologie 2009Les recommandations enimmunohistochimie etimmunocytochimie dans la secondeversion des Recommandations deBonnes Pratiques en Anatomie etCytologie PathologiquesJ-F. MICHIELS, D. HENIN

RBPACP• Première version publiée en 1998– Rédigée par la Commission 4 Afaqap.– Complétée par un répertoire des textes réglementaires :« gestion d’une structure… »– Disponible sur le site afaqap.org.– Diffusée à l’ensemble des structures d’ACP.– Publiée dans Ann Pathol.

RBPACP V2• Validées le 2 octobre 2009 par le CA de l’AFAQAP,représentant les sociétés savantes et professionnelles de ladiscipline.• Mise à jour débutée en décembre 2006, sous la direction duPr D. Hénin :– Complétant la démarche du « Projet Pathologie 2008 ».– Intégrant les modifications réglementaires :• Évolution des pratiques médicales en ACP : EPP, FMC.• Sécurité et risques professionnels.• Normes.– Annexes techniques : IHC, biologie moléculaire.

RECOMMANDATIONS GENERALES• Personnel• Procédures et modes opératoires• Consommables et réactifs• Matériels et automates• Locaux• Gestion des risques• Déchets chimiques• Compte rendu et archivage

PERSONNEL• Fiche de poste.• Formation adaptée :– A la gestion du prélèvement.– A la réalisation des techniques.– A l’utilisation et maintenance des automates.– A la gestion des risques.

Liste des documents recommandés• Fiche de poste IHC.• Liste des formations suivies par le personnel.• Procédures et modes opératoires• Procédures de contrôle qualité.• Résultats contrôles métrologiques• Notices d’utilisation et de maintenance des appareils• Inventaire des réactifs.• Inventaire des agents chimiques dangereux.• Fiches de données de sécurité (FDS).

Consommables et réactifs• Fixateurs, réactifs et automates d’IHCsont considérés comme des DispositifsMédicaux de Diagnostic In Vitro(DMDIV) par l’AFSSAPS.• Déclaration à l’ AFSSAPS des incidentséventuels par le système de« réactovigilance ».

ARCHIVAGE• Archivage des données techniques en liaison avec ledossier patient :– Type AC– N° de lot– Que les résultats soient positifs ou négatifs.• Le matériel biologique (lames et les blocs) estmaintenu dans des conditions techniques permettantleur conservation et leur exploitation, et conformes àla réglementation.• Les archives sont classées et sécurisées.

Recommandations techniques(Annexe 3)• Phase préparatoire ou pré analytique• Immunomarquages et interprétation• Comptes rendus• Contrôles qualité

Phase préparatoire ou pré analytique• Choix de l’échantillon pour la techniqueIHC :– Représentatif de la lésion.– mesurant idéalement moins de 2 cm.– Ne correspondant pas, si possible, aufragment congelé extemporané.

Phase préparatoire ou pré analytique• Échantillon dédié à l’étude IHCsouhaitable.• Délai entre excision/ponction et fixation– courts et maîtrisés– définis dans les procédures

Phase préparatoire ou pré analytique– Anticorps et restauration antigénique adaptésau fixateur.– Fixation est homogène et complète.– Durée de fixation est conforme auxrecommandations.– Volume de fixateur est adapté à celui del’échantillon.

Phase préparatoire ou pré analytique• Réactifs ou procédures (“intendeduse”) validéspar l’industrie pour une application donnée :– utilisation dans d’autres applications nécessite unevalidation préalable.• Le formol tamponné étant le fixateur de référence,les anticorps sont généralement conçus pour êtreutilisés sur tissu fixé au formol.

Phase préparatoire ou pré analytique• Coupes tissulaires– Coupes tissulaires de 3 à 5 µm .– Lames prétraitées pour adhésion maximale.• Restauration antigéniqueType de pré-traitement et tampon adaptés àl’anticorps.

Phase préparatoire ou pré analytique• Préparation de l’échantillon cytologiquepour technique ICC :– Plusieurs types d’échantillons : étalements,spots, culots cellulaires inclus en paraffine oucytoblocs.– La structure dispose de procédures adaptéesaux préparations pour ICC.

Immunomarquage et interprétation• Matériels– Contrôles métrologiques périodiques :• Contrôles des températures des enceintesthermostatiques : réfrigérateurs, congélateurs, étuves,des bains-marie.• Contrôles des pH-mètres.• Contrôles des pipettes.

Immunomarquage et interprétation– Liste des anticorps et des réactifs derévélation et de démasquage.– Fiche technique pour chaque anticorpscomportant :• le type d’anticorps (mono/polyclonal), le clone, laréférence, le fournisseur,• la dilution de travail,• le temps d’incubation,• les conditions de conservation,• le pH et la composition des tampons, et lesprocédés de restauration antigénique,• le système de révélation.

Immunomarquage et interprétation• Les documents suivants sont disponibles :– les adaptations éventuelles, dépendant des paramètresde la phase préparatoire :• fixation alcoolique ou autre.• Congélation.• étalements séchés à l’air.• spots cellulaires.• décalcification, etc.– l’inventaire des témoins.

Validation des résultats• Témoins internes• Témoin externe en cas d’absence de contrôleinterne.• La contre-colorationcoloration– permet d’identifier les structures et les cellulesmarquées et non marquées.– En cas de signal nucléaire, elle ne masque pas lessignaux de faible intensité.

Expression des résultats• Il peut être qualitatif, positif ou négatif.• Il peut être quantitatif ou semi-quantitatif, etaboutir à un score.– Le score se réfère à un système reconnu.– L’intensité du signal dans les cellules d’intérêt est évaluépar comparaison avec celle du contrôle positif interne ouexterne.

Comptes rendus• La formulation des résultats dans les compterendus comprend 4 rubriques :– Nature de la technique.– Nom de l’anticorps.– Résultat du marquage.– Conclusion.• Ces données figurent dans un compte renduspécifique ou sont intégrées dans un compterendu histologique ou cytologique standard.• Une cohérence est recherchée entrel’interprétation des résultats IHC/ICC et cellede la coloration standard.

Contrôles qualité / réactovigilance• Avant utilisation, tout nouvel anticorps et toutnouveau lot d’anticorps sont testés par la structure.• Dans le cadre de la réactovigilance, les non-conformités sources d’incidents ou de risquesd’incidents liées à des anticorps /réactifs/ automatesd’IHC sont déclarées à l'AFSSAPS.• La déclaration se fait à l’aide du formulaire prévu àcet effet (disponible sur le site de l’AFSSAPS).

Contrôles qualité• La qualité des techniques IHC/ICC estrégulièrement évaluée par des contrôlesqualité internes et externes.• Les structures ACP réalisant des IHC à viséeprédictive de réponse à des thérapies cibléesparticipent à des contrôles qualité externesannuels.• Les contrôles qualité externes sont pris encharge par le même personnel que celuiréalisant les examens d’IHC/ICC en routine.

Conclusion• Recommandations diffusées le 16 novembre2009• Site AFAQAP