ISO/TR 13843 Validation of Colilert-18/Quanti-Tray - IDEXX ...

Validation de Colilert ® -18/Quanti-Tray ®pour le dénombrement des bactéries E. coliet des bactéries coliformes dans l’eaujanvier 2008One IDEXX Drive • Westbrook, Maine 04092 États-Unisidexx.com© 2011 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. • 7540-01All ®/TM marks are owned by IDEXX Laboratories, Inc.or its affiliates in the United States and/or other countries.

sélectionnés à partir des 30 échantillons (3 à 5 pour chaque échantillon). Ils ont étésélectionnés de manière à inclure une large gamme d’intensités de couleur jaune. Demême, 100 puits de couleur jaune et fluorescents ont été sélectionnés afin d’illustrer lagamme d’intensité de fluorescence observée. Sur les 30 échantillons seuls 54 puitsnégatifs on été générés, dont deux présentaient une croissance trouble. Les réactionspositives et/ou négatives de la β-galactosidase et la β-glucuronidase ont étéconfirmées et les isolats identifiés en utilisant des galeries d’identification miniaturiséesBBL Crystal E/NF (Becton, Dickinson and Company, Sparks, Maryland, États-Unis).3.2.1 Calcul de la sensibilité, de la spécificité, de la sélectivité, du taux de fauxpositifs et des taux de faux négatifsPour chaque paramètre, les données d’identification ont été divisées en quatrecatégories :a = nombre de puits positifs contenant des coliformes ou E. coli (vrais positifs) ;b = nombre de puits négatifs contenant des coliformes ou E. coli (faux négatifs) ;c = nombre de puits positifs ne contenant pas de coliformes ou E. coli (faux positifs) ;d = nombre de puits négatifs présentant une croissance et ne contenant pas decoliformes ou E. coli (vrais négatifs).À partir des données, la sensibilité, la spécificité, la sélectivité, le taux de faux positifset le taux de faux négatifs pour les coliformes et E. coli ont été calculés de la manièresuivante :Sensibilité = a / (a+b)Spécificité = d / (c+d)Sélectivité = log 10 [(a+c) / (a+b+c+d)]Taux de faux positifs = c / (a+c)Taux de faux négatifs = b / (b+d)Un paramètre supplémentaire, l’efficacité (E), qui fournit la fraction de puitscorrectement attribués, a été calculé par la formule suivante : E = (a+d) / (a+b+c+d).3.2.2 Coliformes non E. coliDes isolats de β-galactosidase ont été obtenus à partir de 100 puits de couleur jaunemais non fluorescents. Aucune réaction de la β-glucuronidase n’a été observée sur cesplaques. Les réactions à l’oxydase et à l’indole, les profils BBL Crystal E/NF et lesidentifications des ces isolats sont présentés dans l’annexe A1. Tous ont été identifiéscomme membres de la famille des entérobactéries autres que E. coli, positifs à la β-galactosidase et négatifs à la β-glucuronidase. En tout, 23 espèces de coliformes ontété récupérées (Tableau 2).3.2.3 E. coliDes isolats de β-glucuronidase ont été obtenus à partir de 100 puits de couleur jauneet fluorescents. Les réactions à l’oxydase et à l’indole, les profils BBL Crystal E/NF etles identifications des ces isolats sont présentés dans l’annexe A2. 99 isolats ont étéidentifiés comme E. coli. L’isolat restant a été identifié comme Klebsiella oxytoca. Cetisolat présentait une réaction positive à la β-glucuronidase dans sa galerie CrystalE/NF.3

Les résultats des analyses de données montrent que pour les bactéries coliformes, laméthode Colilert-18/Quanti-Tray est extrêmement sensible et spécifique, avec des tauxde faux négatifs et de faux positifs de zéro. La méthode est également très sélective,avec une valeur de -0,004, bien meilleure que la valeur de référence de -1 suggéréepar l’ISO/TR 13843 pour les méthodes de dénombrement de colonies. La méthode estégalement très efficace pour les bactéries coliformes avec une valeur d'efficacité de 1.Les données d'identification montrent que Colilert-18/Quanti-Tray permet de récupérerune large gamme de bactéries coliformes.En ce qui concerne E. coli, Colilert-18/Quanti-Tray est également extrêmementsensible et spécifique. La sélectivité (-0,305) est inférieure à celle obtenue pour lesbactéries coliformes, ce qui est attendu pour un système de test en double, E. coliétant un sous-groupe du groupe des bactéries coliformes. La valeur est toutefoismeilleure que la valeur de référence de l’ISO/TR 13843. La méthode est encoreextrêmement efficace (E = 0,995) pour la détection de E. coli.4 Incertitude de numération (ISO 13843 section 10.2.1 et Annexe B)La répétabilité et la reproductibilité sont deux estimations de la fiabilité pouvant êtredéterminées par une méthode analytique. Il peut s’agir d’une évaluation de l'ensemblede la méthode à l'aide d'échantillons naturels appropriés ou de l’incertitude denumération associée à la lecture des résultats d’une méthode. Quelle que soit laméthode, le résultat obtenu dépendra de la facilité avec laquelle les analystes pourronteffectuer la numération de colonies ou considérer une réaction MPN comme positive.C'est-à-dire que cela dépendra du degré de différence morphologique entre lescolonies des organismes cibles et les colonies des organismes non cibles lors d’undénombrement sur une gélose, ou de la clarté des réactions positives ou négatives lorsdes tests MPN à base de bouillons. Ainsi, les évaluations de l’incertitude denumération peuvent fournir une indication de tout problème potentiel pouvant survenirlors de l’adoption d’une méthode généralisée.La répétabilité (r) et la reproductibilité (R) sont définies ainsi :RépétabilitéReproductibilitéétroitesse de l’accord entre les résultats de mesures successives dumême mesurande dans les mêmes conditions de mesureétroitesse de l’accord entre les résultats de mesures du mêmemesurande réalisées dans des conditions de mesure modifiéesDans le cadre de la numération de colonies microbiologiques sur une plaque de géloseou de réactions positives lors d’un test MPN, cette « condition », égale ou modifiée, faitréférence à l’analyste qui effectue le dénombrement. Ainsi, dans ce contexte, larépétabilité est l’accord entre des numérations obtenues par un même analyste aprèsrépétition du dénombrement, et la reproductibilité est l'accord entre des numérationsobtenues par au moins deux analystes après répétition du dénombrement. L’évaluationde la reproductibilité fournit généralement plus d’informations que l’évaluation de larépétabilité.L’annexe B de l’ISO/TR 13843 fournit des conseils sur l’évaluation de la répétabilité etde la reproductibilité de la numération à l'aide des écarts types relatifs (RSD) denumérations répétées. Elle recommande également, lors de l’utilisation de culturespures, que les RSD soient idéalement < 0,02 (c.-à-d. un écart inférieur ou égal à 2 %).Des études d’incertitude de numération ont été réalisées par les analystes d’IDEXX etles résultats sont présentés à l’annexe B. La numération a été réalisée de manière à ce5

25 °C ne présentent aucune différence de performance avec une conservationmaximale de 541 jours, bien au-delà de la période d’un an indiquée. La température deconservation la plus élevée a été choisie car elle constitue un plus grand défi à lastabilité du milieu Colilert-18 qu’une conservation à des températures de réfrigération.6 Limite de travail supérieure (ISO/TR 13843 sections 10.2.4 et 6.3.3)Le test Colilert ® -18/Quanti-Tray ® est un procédé utilisant la technique du nombre leplus probable (MPN), avec une gamme de numération arbitraire de 0 à 201, définie parle nombre de puits du plateau Quanti-Tray. Selon l’ISO/TR 13843 section 6.3.3,aucune limite supérieure ne peut être définie pour les méthodes MPN pour des raisonspratiques et statistiques « car la précision ne dépend pas d’une manière simple dunombre de particules introduites dans le dispositif de détection ».7 Précision (ISO/TR 13843 sections 10.2.5 et 9.5.5)La précision d’une méthode MPN est décrite par les intervalles de confiance à 95 %calculés pour chaque valeur MPN (ISO/TR 13843 section 9.5.5). Les intervalles deconfiance pour les numérations de Colilert ® -18/Quanti-Tray ® , calculés à l'aide duprogramme disponible en ligne auprès de la Food and Drug Administration (FDA) desÉtats-Unis, dans le Bacteriological Analytical Manual (BAM)(http://www.cfsan.fda.gov/~ebam/bam-a2.html#excl), sont donnés à l’annexe D.Une répétabilité théorique pour chaque MPN peut être obtenue à partir du MPN et deses intervalles de confiance. Des valeurs d’incertitude relative pour chaque MPN(log 10 SD, calculées à partir des valeurs d’intervalle de confiance à 95 % des MPN) etde répétabilité (incertitude standard relative) sous forme de coefficients de variation(%CV) sont également présentées à l’annexe D. Ces valeurs de Poisson peuvent êtreutilisées comme valeurs de précision minimales avec lesquelles toutes donnéesappropriées qu’un laboratoire peut posséder (par ex. relatives à la variation lors de ladécantation du volume de test ou à l’incertitude de numération) peuvent être associéespour obtenir une estimation globale de la répétabilité pour chaque MPN.8 Références8.1 Normes ISOISO 9308-1:2000 Qualité de l’eau – Recherche et dénombrement des Escherichia coliet des bactéries coliformes – Partie 1 : Méthode par filtration sur membrane. Genève :Organisation internationale de normalisation.ISO/TR 13843:2000(E) Qualité de l’eau – Lignes directrices pour la validation desméthodes microbiologiques. Genève : Organisation internationale de normalisation.7

Annexe ADonnées issues des études de sensibilité, spécificité etsélectivité (voir Section 3.2)Annexe A1Identification des isolats issus de puits de couleur jaune maisnon fluorescents de Colilert ® -18/Quanti-Tray ®Réf. del’isolat Oxydase Indole Profil Crystal E/NF Identification ConfianceY1 - + 5765637153 Enterobacter sakazakii 0,5861Y2 - - 4764417153 Pantoea agglomerans 0,7217Y3 - + 4724477151 Kluyvera cryocrescens 0,9829Y4 - - 7764477153 Enterobacter cloacae 0,9962Y5 - + 4764477151 Kluyvera cryocrescens 0,6287Y6 - - 4724467153 Pantoea agglomerans 0,7127Y7 - + 5764475555 Klebsiella oxytoca 0,9825Y8 - - 4760427053 Pantoea agglomerans 0,9481Y9 - - 5764637051 Kluyvera ascorbata 0,9264Y10 - - 5766477152 Enterobacter cloacae 0,9886Y11 - - 7424676151 Citrobacter freundii 0,9335Y12 - - 7764672153 Enterobacter cloacae 0,8268Y13 - - 7764476157 Enterobacter sakazakii 0,6102Y14 - + 5764637151 Kluyvera ascorbata 0,9925Y15 - + 5765677151 Kluyvera ascorbata 0,8702Y16 - - 4764627151 Escherichia vulneris 0,5764Y17 - - 7734457051 Pantoea agglomerans 0,9932Y18 - + 5765477157 Klebsiella oxytoca 0,8524Y19 - - 7766276157 Serratia liquefaciens 0,5712Y20 - - 5764476153 Enterobacter cloacae 0,8943Y21 - - 3764217153 Cedecea lapagei 0,9835Y22 - - 5764427151 Pantoea agglomerans 0,7613Y23 - + 7764637157 Enterobacter sakazakii 0,9734Y24 - + 5764627452 Leclercia adecarboxylata 0,999Y25 - - 7764627555 Klebsiella pneumoniae 0,9154Y26 - - 0764437152 Pantoea agglomerans 0,8776Y27 - - 7765275557 Serratia rubidaea 0,9942Y28 - - 4760056153 Enterobacter asburiae 0,9504Y29 - - 5765276157 Serratia liquefaciens 0,5545Y30 - + 5764617151 Kluyvera ascorbata 0,982Y31 - + 5764677557 Klebsiella oxytoca 0,9555Y32 - - 7564677151 Enterobacter cloacae 0,9987Y33 - - 4560477153 Enterobacter cloacae 0,9961Y34 - - 5464454151 Citrobacter freundii 0,9998Y35 - - 5464654155 Citrobacter freundii 0,9994Y36 - - 5764427151 Pantoea agglomerans 0,7613Y37 - - 5664456055 Citrobacter freundii 0,9973Y38 - - 4764475555 Klebsiella pneumoniae 0,9241Y39 - + 5760467555 Klebsiella pneumoniae 0,9413Y40 - - 4764627051 Escherichia vulneris 0,9475Y41 - - 5764677150 Enterobacter cloacae 0,8043Y42 - - 4760473151 Enterobacter cloacae 0,96738

Y43 - + 5764637151 Kluyvera ascorbata 0,9925Y44 - - 5766476156 Enterobacter sakazakii 0,8111Y45 - - 7765627157 Enterobacter sakazakii 0,9416Y46 - + 5774677153 Kluyvera ascorbata 0,9439Y47 - - 7775677555 Klebsiella pneumoniae 0,9853Y48 - - 7765627157 Enterobacter sakazakii 0,9416Y49 - - 5464477553 Enterobacter cloacae 0,9999Y50 - - 7775637153 Enterobacter cancerogenus 0,5033Y51 - + 4774437151 Kluyvera cryocrescens 0,8422Y52 - - 5764677557 Enterobacter aerogenes 0,8747Y53 - - 5464457051 Citrobacter freundii 0,9962Y54 - - 7764272153 Enterobacter cloacae 0,8189Y55 - - 5766477152 Enterobacter cloacae 0,9886Y56 - - 5764476152 Enterobacter cloacae 0,9048Y57 - - 5764256057 Serratia plymuthica 0,8677Y58 - + 5764676557 Serratia odorifera 0,7963Y59 - + 5420677151 Citrobacter amalonaticus 0,8735Y60 - - 5766476152 Enterobacter cloacae 0,6927Y61 - - 5470473153 Enterobacter cloacae 0,9996Y62 - + 5774637151 Kluyvera ascorbata 0,9864Y63 - + 5764676153 Kluyvera ascorbata 0,9308Y64 - - 4764476057 Enterobacter sakazakii 0,7089Y65 - - 5766476153 Enterobacter cloacae 0,6618Y66 - - 7765671151 Enterobacter cloacae 0,937Y67 - - 7764477153 Enterobacter cloacae 0,9962Y68 - - 5764276057 Serratia plymuthica 0,8302Y69 - - 4675477153 Enterobacter cloacae 0,9921Y70 - - 5765276057 Serratia plymuthica 0,6877Y71 - - 5624657151 Citrobacter freundii 0,996Y72 - - 5725654447 Serratia fonticola 0,9933Y73 - - 5766477152 Enterobacter cloacae 0,9886Y74 - - 5764477555 Klebsiella pneumoniae 0,9919Y75 - - 5724627052 Escherichia vulneris 0,9987Y76 - - 5766476153 Enterobacter cloacae 0,6618Y77 - + 5420677151 Citrobacter amalonaticus 0,8735Y78 - - 7767276157 Serratia liquefaciens 0,6819Y79 - - 5420444051 Citrobacter freundii 0,9799Y80 - - 7764276557 Serratia marcescens 0,9547Y81 - - 5766477153 Enterobacter cloacae 0,9872Y82 - - 5423614153 Hafnia alvei 0,9847Y83 - + 5764627151 Kluyvera ascorbata 0,9942Y84 - + 5765677557 Klebsiella oxytoca 0,9715Y85 - - 5765476553 Enterobacter cloacae 0,9226Y86 - - 5767476152 Enterobacter cloacae 0,7434Y87 - + 5764637051 Kluyvera ascorbata 0,9876Y88 - - 5764276057 Serratia plymuthica 0,8302Y89 - + 5664677151 Kluyvera ascorbata 0,9349Y90 - - 4464654141 Citrobacter freundii 0,999Y91 - - 5764627051 Escherichia vulneris 0,6454Y92 - - 5764455555 Klebsiella pneumoniae 0,9504Y93 - - 5765647151 Pantoea agglomerans 0,68569

Y94 - - 7765256157 Serratia spp. 0,9846Y95 - - 5765477153 Enterobacter cloacae 0,9957Y96 - + 5464654151 Citrobacter freundii 0,9771Y97 - + 5765637151 Kluyvera ascorbata 0,8306Y98 - - 5764427151 Pantoea agglomerans 0,7613Y99 - - 5764077153 Enterobacter cloacae 0,9948Y100 - - 5420656050 Citrobacter freundii 0,99410

Annexe A2Identification des isolats issus de puits de couleur jaune etfluorescents de Colilert ® -18/Quanti-Tray ®Réf. del’isolat Oxydase Indole Profil Crystal E/NF Identification ConfianceF1 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F2 - + 5461444171 Escherichia coli 0,9737F3 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F4 - + 4464444171 Escherichia coli 0,9813F5 - + 5465464171 Escherichia coli 0,991F6 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F7 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F8 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F9 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F10 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F11 - + 5424444171 Escherichia coli 0,9997F12 - + 4464444171 Escherichia coli 0,9813F13 - + 5424444171 Escherichia coli 0,9997F14 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F15 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F16 - + 5425444571 Escherichia coli 0,9679F17 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F18 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F19 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F20 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F21 - + 5424444171 Escherichia coli 0,9997F22 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F23 - + 5424444171 Escherichia coli 0,9997F24 - + 5465444161 Escherichia coli 0,9976F25 - + 5465444161 Escherichia coli 0,9976F26 - + 5464044171 Escherichia coli 0,999F27 - + 5465446071 Escherichia coli 0,9945F28 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F29 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F30 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F31 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F32 - + 5425444571 Escherichia coli 0,9679F33 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F34 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F35 - + 5424444171 Escherichia coli 0,9997F36 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F37 - + 5464044171 Escherichia coli 0,999F38 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F39 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F40 - + 5465464171 Escherichia coli 0,991F41 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F42 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F43 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F44 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F45 - + 5424444171 Escherichia coli 0,9997F46 - + 5464444171 Escherichia coli 0,999811

F47 - + 5665444171 Escherichia coli 0,9962F48 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F49 - + 5465404171 Escherichia coli 0,9314F50 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F51 - + 5465464171 Escherichia coli 0,991F52 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F53 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F54 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F55 - + 5424444171 Escherichia coli 0,9997F56 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F57 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F58 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F59 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F60 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F61 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F62 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F63 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F64 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F65 - + 5424444171 Escherichia coli 0,9997F66 - + 5665444171 Escherichia coli 0,9962F67 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F68 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F69 - + 5435444171 Escherichia coli 0,9803F70 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F71 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F72 - + 4464444171 Escherichia coli 0,9813F73 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F74 - + 5724444571 Escherichia coli 0,9999F75 - + 5465464171 Escherichia coli 0,991F76 - + 5424444171 Escherichia coli 0,9997F77 - + 5424444171 Escherichia coli 0,9997F78 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F79 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F80 - - 5464444171 Escherichia coli 0,9998F81 - + 5424444061 Escherichia coli 0,8035F82 - + 5464044171 Escherichia coli 0,999F83 - + 5465446071 Escherichia coli 0,9945F84 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F85 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F86 - + 5564044171 Escherichia coli 0,9911F87 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F88 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F89 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F90 - + 5424444171 Escherichia coli 0,9997F91 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F92 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F93 - + 5424444171 Escherichia coli 0,9997F94 - + 5420444571 Escherichia coli 0,9983F95 - + 5425444571 Escherichia coli 0,9679F96 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F97 - + 5464444171 Escherichia coli 0,999812

F98 - + 5464444171 Escherichia coli 0,9998F99 - + 5465464171 Escherichia coli 0,991F100 - + 5765475577 Klebsiella oxytoca 0,748613

Annexe A3 Identification des isolats issus de puits négatifs de Colilert ® -18/Quanti-Tray ®Réf. deβ-Gal β-Gluc OxydasProfil CrystalIndolel’isolateE/NFIdentification ConfianceN1PAS DE CROISSANCEN2PAS DE CROISSANCEN3PAS DE CROISSANCEN4 - - + - 3103310212 Shewanella putrefaciens 0,9994N5PAS DE CROISSANCEN6PAS DE CROISSANCEN7PAS DE CROISSANCEN8PAS DE CROISSANCEN9PAS DE CROISSANCEN10PAS DE CROISSANCEN11PAS DE CROISSANCEN12PAS DE CROISSANCEN13PAS DE CROISSANCEN14PAS DE CROISSANCEN15PAS DE CROISSANCEN16PAS DE CROISSANCEN17 - - + - 3103310212 Shewanella putrefaciens 0,9994N18PAS DE CROISSANCEN19PAS DE CROISSANCEN20PAS DE CROISSANCEN21PAS DE CROISSANCEN22PAS DE CROISSANCEN23PAS DE CROISSANCEN24PAS DE CROISSANCEN25PAS DE CROISSANCEN26PAS DE CROISSANCEN27PAS DE CROISSANCEN28PAS DE CROISSANCEN29PAS DE CROISSANCEN30PAS DE CROISSANCEN31PAS DE CROISSANCEN32PAS DE CROISSANCEN33PAS DE CROISSANCEN34PAS DE CROISSANCEN35PAS DE CROISSANCEN36PAS DE CROISSANCEN37PAS DE CROISSANCEN38PAS DE CROISSANCEN39PAS DE CROISSANCEN40PAS DE CROISSANCEN41PAS DE CROISSANCEN42PAS DE CROISSANCEN43PAS DE CROISSANCEN44PAS DE CROISSANCEN45PAS DE CROISSANCEN46PAS DE CROISSANCE14

N47N48N49N50N51N52N53N54PAS DE CROISSANCEPAS DE CROISSANCEPAS DE CROISSANCEPAS DE CROISSANCEPAS DE CROISSANCEPAS DE CROISSANCEPAS DE CROISSANCEPAS DE CROISSANCE15

Annexe BDonnées issues des études d’incertitudes de numération (voirSection 4)Annexe B1Incertitude de numération pour les MPN* de puits de couleurjaune non fluorescents de Colilert ® -18/Quanti-Tray ® inoculés avecKlebsiella pneumoniae ATCC 33186* Most Probable Number (Nombre le plus probable) sous formed’entierÉchantillonAnalyste ALecture1Analyste ALecture2AnalysteBLectureAnalysteCLectureRépétabilitéReproductibilitéMoyenn Écart RSDMPN MPN MPN MPNÉcart RSDe type carré e type carré1 2 2 2 2 2,00 0,0000 0,0000 2,00 0,0000 0,00002 6 6 6 6 6,00 0,0000 0,0000 6,00 0,0000 0,00003 19 19 19 19 19,00 0,0000 0,0000 19,00 0,0000 0,00004 18 18 18 18 18,00 0,0000 0,0000 18,00 0,0000 0,00005 36 36 36 36 36,00 0,0000 0,0000 36,00 0,0000 0,00006 34 34 34 36 34,00 0,0000 0,0000 34,67 1,1547 0,00117 31 31 31 31 31,00 0,0000 0,0000 31,00 0,0000 0,00008 27 27 27 27 27,00 0,0000 0,0000 27,00 0,0000 0,00009 56 56 56 56 56,00 0,0000 0,0000 56,00 0,0000 0,000010 50 50 50 50 50,00 0,0000 0,0000 50,00 0,0000 0,000011 41 41 41 41 41,00 0,0000 0,0000 41,00 0,0000 0,000012 48 48 48 48 48,00 0,0000 0,0000 48,00 0,0000 0,000013 56 56 56 56 56,00 0,0000 0,0000 56,00 0,0000 0,000014 89 89 89 89 89,00 0,0000 0,0000 89,00 0,0000 0,000015 78 78 78 78 78,00 0,0000 0,0000 78,00 0,0000 0,000016 66 70 70 70 68,00 2,8284 0,0017 68,67 2,3094 0,001117 109 109 109 109 109,00 0,0000 0,0000 109,00 0,0000 0,000018 78 89 89 89 83,50 7,7782 0,0087 85,33 6,3509 0,005519 95 95 95 95 95,00 0,0000 0,0000 95,00 0,0000 0,000020 95 95 95 95 95,00 0,0000 0,0000 95,00 0,0000 0,000021 95 101 101 101 98,00 4,2426 0,0019 99,00 3,4641 0,001222 83 89 89 89 86,00 4,2426 0,0024 87,00 3,4641 0,001623 109 109 109 109 109,00 0,0000 0,0000 109,00 0,0000 0,000024 101 101 109 109 101,00 0,0000 0,0000 106,33 4,6188 0,001925 145 145 145 145 145,00 0,0000 0,0000 145,00 0,0000 0,000026 145 145 145 145 145,00 0,0000 0,0000 145,00 0,0000 0,000027 201 201 201 201 201,00 0,0000 0,0000 201,00 0,0000 0,000028 165 165 165 165 165,00 0,0000 0,0000 165,00 0,0000 0,000029 165 165 165 165 165,00 0,0000 0,0000 165,00 0,0000 0,000030 201 201 201 201 201,00 0,0000 0,0000 201,00 0,0000 0,0000Somme RSD 0,0147 Somme RSD 0,0125RSDc 0,0221 RSDc 0,020416

Appendix B2Incertitude de numération pour les MPN* de puits de couleurjaune fluorescents de Colilert ® -18/Quanti-Tray ® inoculés avec E.coli ATCC 25922* Most Probable Number (Nombre le plus probable) sous formed’entierÉchantillonAnalyste ALecture1Analyste ALecture2AnalysteBLectureAnalysteCLectureRépétabilitéReproductibilitéMoyenn Écart RSDMPN MPN MPN MPNÉcart RSDe type carré e type carré1 6 6 6 6 6,00 0,0000 0,0000 6,00 0,0000 0,00002 11 11 11 11 11,00 0,0000 0,0000 11,00 0,0000 0,00003 9 9 9 9 9,00 0,0000 0,0000 9,00 0,0000 0,00004 29 29 29 29 29,00 0,0000 0,0000 29,00 0,0000 0,00005 32 32 32 32 32,00 0,0000 0,0000 32,00 0,0000 0,00006 21 21 21 21 21,00 0,0000 0,0000 21,00 0,0000 0,00007 36 36 36 36 36,00 0,0000 0,0000 36,00 0,0000 0,00008 32 32 32 32 32,00 0,0000 0,0000 32,00 0,0000 0,00009 56 56 56 56 56,00 0,0000 0,0000 56,00 0,0000 0,000010 50 50 50 50 50,00 0,0000 0,0000 50,00 0,0000 0,000011 48 48 48 48 48,00 0,0000 0,0000 48,00 0,0000 0,000012 45 45 45 48 45,00 0,0000 0,0000 46,00 1,7321 0,001413 78 78 78 78 78,00 0,0000 0,0000 78,00 0,0000 0,000014 70 70 70 70 70,00 0,0000 0,0000 70,00 0,0000 0,000015 66 66 66 66 66,00 0,0000 0,0000 66,00 0,0000 0,000016 78 78 78 78 78,00 0,0000 0,0000 78,00 0,0000 0,000017 95 95 95 95 95,00 0,0000 0,0000 95,00 0,0000 0,000018 109 109 109 109 109,00 0,0000 0,0000 109,00 0,0000 0,000019 101 101 101 101 101,00 0,0000 0,0000 101,00 0,0000 0,000020 89 89 89 89 89,00 0,0000 0,0000 89,00 0,0000 0,000021 130 130 130 130 130,00 0,0000 0,0000 130,00 0,0000 0,000022 95 95 95 95 95,00 0,0000 0,0000 95,00 0,0000 0,000023 70 70 70 70 70,00 0,0000 0,0000 70,00 0,0000 0,000024 74 74 74 74 74,00 0,0000 0,0000 74,00 0,0000 0,000025 109 109 109 109 109,00 0,0000 0,0000 109,00 0,0000 0,000026 101 101 101 101 101,00 0,0000 0,0000 101,00 0,0000 0,000027 145 145 145 145 145,00 0,0000 0,0000 145,00 0,0000 0,000028 165 165 165 165 165,00 0,0000 0,0000 165,00 0,0000 0,000029 118 118 118 118 118,00 0,0000 0,0000 118,00 0,0000 0,000030 130 130 130 130 130,00 0,0000 0,0000 130,00 0,0000 0,0000Somme RSD 0,0000 Somme RSD 0,0014RSDc 0,0000 RSDc 0,006917

Annexe CNumérations en double de suspensions de E. coli, Klebsiellapneumoniae et Citrobacter freundii avec Colilert ® -18/Quanti-Tray ®après 18 heures et 22 heures d’incubation en utilisant Colilert-18conservé à 25 °C jusqu’à 541 jours (voir Section 5)Jour aprèsfabrication8 24715 916824 1491030 13171136 8131444 85956 134484 1088111 9521138 329175 71112205 10814269 81010319 131813367 211Nombre de puits positifsEscherichia coli Klebsiella pneumoniae Citrobacter freundii% de% de% de18 h 22 h change 18 h 22 h change 18 h 22 h changementmentment247916814910131711813148591344108895213297111210814810101318132110000000000000000000000000000000000000000000018121115919131412161816131813172414191016141416192012121415121520221720181326191517111221121115919131412161816131813172414191016141416192012121415121620221720181326191517111221000000000000000000000000000000+ 7 %0000000000000111416257141618181881615161116106711118122017178101316203018182214171441313172011141635714161818188161516121811714111181220171791013162130181822141714515141720000+ 50 %00000000000+ 9 %+ 13 %+ 10 %+ 17 %+ 100 %0000000+ 13 %000+ 5 %0000000+ 25 %+ 15 %+ 8 %00

541 710910 10 0 20 20 0 21 21 07 0 13 13 0 11 1110 0 17 17 0 11 129 0 16 16 0 8 90+ 9 %+ 13 %19

Annexe DIntervalles de confiance à 95 % et répétabilités théoriques pourchaque valeur MPN pour les 51 puits de Colilert ® -18/Quanti-Tray ®(voir Section 7)Nb de puitsdonnant uneréactionpositiveMPN paréchantillon de100 mlIntervalles deconfiance à 95 %Inférieur SupérieurRépétabilité théoriqueÉcart type derépétabilitéLog 10 SDIncertitudestandardrelative%CV0

36 62,4 44,6 88,8 0,0770 17,737 65,9 47,2 93,7 0,0765 17,638 69,7 50,0 99,0 0,0761 17,539 73,8 53,1 104,8 0,0758 17,440 78,2 56,4 111,2 0,0756 17,441 83,1 59,9 118,3 0,0756 17,442 88,5 63,9 126,2 0,0757 17,443 94,5 68,2 135,4 0,0761 17,544 101,3 73,1 146,0 0,0768 17,745 109,1 78,6 158,7 0,0778 17,946 118,4 85,0 174,5 0,0794 18,347 129,8 92,7 195,0 0,0819 18,948 144,5 102,3 224,1 0,0859 19,849 165,2 115,2 272,2 0,0929 21,450 200,5 135,8 387,6 0,1094 25,251 > 200,5 146,1 infini - -21