Fonction et régulation de la protéine ICAP-1alpha dans la ...

tel-00435843, version 1 - 24 Nov 2009
augmentation de leur vitesse d’assemblage (Article; Figure 8). L’augmentation de la densité
en fibronectine augmente le nombre et la vitesse d’assemblage des adhérences focales dans
les cellules sauvages, mimant le phénotype Icap-1 -/- . Par contre, à forte densité de matrice, la
formation et la dynamique des adhérences focales sont similaires entres les cellules sauvages
et Icap-1 -/- suggérant que la régulation de l’assemblage des adhérences devient indépendante
d’ICAP-1α. La perte d’ICAP-1α diminue la capacité des cellules à percevoir des matrices de
faibles densités résultant en une incapacité d’adaptation du comportement adhésif et
migratoire aux variations physiologiques de densité de la MEC.
I.1.3. Résultats complémentaires
I.1.3.1. ICAP-1α limite une étape de pré-activation des intégrines
Tandis que l’induction de l’activation des intégrines par le MnCl2 ou l’anticorps 9EG7
dans les cellules sauvages reproduit le phénotype migratoire et adhésif des cellules Icap-1 -/- , le
même traitement appliqué aux cellules Icap-1 -/- n’affecte pas leur comportement adhésif. Ces
données suggèrent que l’intégrine β1 dans les cellules Icap-1 -/- se trouvent préférentiellement
dans une conformation active (Article 1 ; Figures 6, 7 et S4). En effet, la mesure de l’affinité
des intégrines par un test de liaison de la fibronectine III7-10 dans les cellules Icap-1 -/- a
permis de mettre en évidence que la perte d’ICAP-1α favorise l’activation des récepteurs à la
fibronectine par rapport aux cellules sauvages (Article 1 ; Figures 6). Cependant, le traitement
au 9EG7 induit une activation plus importante de l’intégrine β1 suggérant que ce récepteur
n’est pas totalement activée dans les cellules Icap-1 -/- (Figure 19).
Les cellules Icap-1 -/- ont un phénotype adhésif similaire aux cellules exprimant le
mutant β1 D759A . Des études précédentes ont montré que cette mutation n’induit pas
l’activation complète de l’intégrine β1 qui requiert la liaison de la taline (Wegener, Partridge
et al. 2007). Ces données suggèrent que l’absence d’ICAP-1α comme la mutation β1 D759A
favoriserait la pré-activation de l’intégrine β1.
Figure 19 : La perte d’ICAP-1α induit une activation partielle de l’intégrine β1.
L’état d’activation de l’intégrine β1 dans les cellules Icap-1 +/+ et Icap-1 -/- traitées ou non avec l’anticorps
activateur anti-intégrine β1 9EG7 (10µg/ml) est déterminé par un test de liaison de la fibronectine III7-10
(FNIII7-10) 2µM couplée au fluorochrome FITC. L’intensité de fluorescence moyenne des cellules marquées en
présence du substrat seul ou du substrat avec l’anticorps activateur 9EG7 est soustraite de la fluorescence
contrôle réalisée avec EDTA/EGTA. Cette différence est considérée comme la liaison spécifique du fragment
FNIII7-10 sur les intégrines. L’expérience a été reproduite avec 4µM de FNIII7-10 et aucune augmentation du
signal n’a été observée en présence de 9EG7 suggérant que les intégrines sont saturées dans ces conditions. Pour
chaque type cellulaire, la valeur de la condition 9EG7 est considérée comme la liaison maximale (100%).
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