Fonction et régulation de la protéine ICAP-1alpha dans la ...
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tel-00435843, version 1 - 24 Nov 2009<br />
Figure 27: La <strong>régu<strong>la</strong>tion</strong> <strong>de</strong> <strong>la</strong> dynamique d’assemb<strong>la</strong>ge <strong>de</strong>s adhérences focales par <strong>la</strong> CaMKII nécessite <strong>la</strong><br />
phosphory<strong>la</strong>tion <strong>et</strong> l’ interaction <strong>de</strong> <strong>la</strong> <strong>protéine</strong> <strong>ICAP</strong>-1α sur l’intégrine β1.<br />
A. Les ostéob<strong>la</strong>stes Icap-1 +/+ exprimant <strong>la</strong> <strong>protéine</strong> VASP-EGFP sont traités ou non au KN-93 (10µM) puis<br />
étalées sur fibronectine 1µg/ml <strong>et</strong> observées au microscope (Axiovert200M, Zeiss). Les adhérences focales au<br />
front <strong>de</strong> migration sont soumises à <strong>de</strong>s cycles d’assemb<strong>la</strong>ge <strong>et</strong> <strong>de</strong> désassemb<strong>la</strong>ge (flèches <strong>de</strong> couleur).<br />
L’inhibition <strong>de</strong> <strong>la</strong> CaMKII par le KN-93 augmente <strong>la</strong> taille <strong>de</strong>s adhérences focales par fusion <strong>de</strong>s adhérences<br />
existantes <strong>et</strong> ralentie leur dynamique (flèche b<strong>la</strong>nche). Echelle : 5µm.<br />
B-C. Quantification <strong>de</strong> <strong>la</strong> dynamique <strong>de</strong>s adhérences isolées <strong>de</strong>s ostéob<strong>la</strong>stes Icap-1 +/+ , Icap-1 -/- , Icap-1 T38A ,<br />
Icap-1 T38D (B), <strong>et</strong> β1 WT , β1 V787T <strong>et</strong> β1 D759A (C) exprimant <strong>la</strong> <strong>protéine</strong> VASP fusionnée à <strong>la</strong> EGFP ou à <strong>la</strong> mRFP <strong>et</strong><br />
traités ou non au KN-93 (10µM) Trois paramètres sont mesurés : les vitesses initiales d’assemb<strong>la</strong>ge <strong>et</strong> <strong>de</strong><br />
désassemb<strong>la</strong>ge (en minutes -1 ) <strong>et</strong> le temps <strong>de</strong> vie (en minutes) <strong>de</strong>s adhérences focales.<br />
Résultats | 101