Fonction et régulation de la protéine ICAP-1alpha dans la ...

tel-00435843, version 1 - 24 Nov 2009
II.2.4. La CaMKII régule négativement l’état d’affinité de l’intégrine β1 β1 β1 de façon
similaire à ICAP-1α
La protéine ICAP-1α régule négativement l’état d’affinité de l’intégrine β1 (Bouvard, Aszodi
et al. 2007; Millon-Fremillon, Bouvard et al. 2008). Nos résultats montrent que la
phosphorylation d’ICAP-1α médiée par la CaMKII induit son interaction avec l’intégrine β1
et régule négativement les adhérences focales à intégrines β1. La protéine ICAP-1α et la
CaMKII pourraient agir dans une même voie de signalisation régulant l’affinité de l’intégrine
β1. Nous avons utilisé le mutant de pré-activation de l’intégrine β1 où le pont salin entre les
sous-unités α et β localisé en région proximale membranaire est rompu par la substitution de
l’aspartate 759 en alanine (D759A). Ce mutant est exprimé dans des ostéoblastes déficients en
intégrine β1 traités ou non au KN-93 ou exprimant le mutant CaMKII T286D et la morphologie
des adhérences focales est comparée avec l’intégrine β1 sauvage (Figure 26).
A 2 heures d’étalement, l’inhibition de la CaMKII par le KN-93 induit une augmentation de la
taille des adhérences focales contenant l’intégrine β1 sauvage (Figure 26A et B). Au contraire,
l’activation constitutive de la CaMKII (CaMKII T286D ) réduit la croissance des adhérences
contenant l’intégrine β1 sauvage . La pré-activation de l’intégrine β1 par la substitution D759A
contrecarre l’effet du KN-93. Aucune modification de la surface des sites adhésifs n’est notée
dans le cas de l’intégrine β1 D759A dans ces deux conditions (Figure 26A et B). La densité en
intégrines β1 au sein des adhérences focales n’est modifiée ni par l’augmentation de l’affinité
de l’intégrine β1 ni par la modulation de l’activité de la CaMKII (Figure 26B).
Par contre, le mutant β1 D759A induit l’apparition d’adhérences focales en région centrale, de
façon similaire à la perte d’ICAP-1 et au phénotype causé par l’inhibition de la CaMKII dans
les cellules sauvages (β1 sauvage , Icap-1 +/+ et Icap-1 rescue ) (Figure 26A) (Millon-Fremillon,
Bouvard et al. 2008). Avec un étalement plus important (16 heures), alors que l’inhibition de
la CaMKII induit la délocalisation centrale des adhérences dans les cellules β1 sauvage , le patron
de distribution des adhérences dans les cellules β1 D759A reste localisé en région centrale et
périphérique (Figure 26C). La localisation des adhérences focales à intégrine β3 n’est pas
altérée ni par la mutation β1 D759A ni par l’inhibition de la CaMKII, ces adhérences sont
périphériques (Figure 26C). Ainsi, la stimulation de l’activation de l’intégrine β1 mime
l’inhibition de la CaMKII et la perte d’ICAP-1. Ces données suggèrent que la CaMKII régule
négativement l’activation de l’intégrine β1, de façon similaire à ICAP-1.
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