IMAGEN™ Adenovirus - Oxoid

11.1.2 Negative Kontrolle
Falls eine negative Kontrolle erwünscht ist, empfiehlt sich die Verwendung von nicht infizierten, intakten
Zellen des Typs, der zur Kultur und Isolierung von Adenoviren verwendet wird. Die Zellen sind wie in
Abschnitt 9.2 beschrieben zu präparieren und zu fixieren und anschließend gemäß der Beschreibung in
Abschnitt 10 anzufärben.
11.2 KLINISCHE PROBEN
11.2.1 Erscheinungsbild Adenovirus-infizierter Zellen
Intrazelluläre, nukleäre und/oder zytoplasmatische, granuläre apfelgrüne Fluoreszenz wird bei mit
Adenovirus befallenen Epithelzellen der Atemwege oder Konjunktiva sichtbar.
Nicht infizierte Zellen sind bei Gegenfärbung mit Evans-Blau rot angefärbt.
11.2.2 Interpretation der Ergebnisse
Eine positive Diagnose wird gestellt, wenn eine oder mehrere Zellen der fixierten angefärbten Probe die
typische, in Abschnitt 11.2.1 beschriebene Fluoreszenz aufweisen.
Eine negative Diagnose wird gestellt, wenn die fixierten Proben nach Anfärbung mit dem Reagenz keine
Fluoreszenz aufweisen.
Bei direkt angefärbtem nasopharyngealem Absaugsekret oder bei ophthalmischen Proben müssen
mindestens 20 nicht infizierte Epithelzellen der Atemwege oder Konjunktiva sichtbar sein, um ein negatives
Ergebnis zu rechtfertigen. Siehe Abschnitt 11.2.3, wenn zu wenig Zellen vorliegen.
11.2.3 Zu wenig Zellen
Falls auf dem Objektträger zu wenig Zellen vorhanden sind, wird der Rest der klinischen Probe 10 Minuten
bei 380 g und Raumtemperatur (15-30 °C) zentrifugiert. Die Zellen werden in einer kleineren Menge PBS
resuspendiert (25 µL), bevor sie wieder in der Vertiefung des Objektträgers aufgebracht werden. Alternativ
hierzu sollte eine neue klinische Probe angefordert werden.
11.3 BESTÄTIGUNG IN DER ZELLKULTUR
11.3.1 Erscheinungsbild Adenovirus-infizierter Zellen
Infizierte Zellen weisen eine intrazelluläre, nukleäre und/oder zytoplasmatische apfelgrüne Fluoreszenz auf
und werden als Adenovirus-positiv registriert.
Nicht infizierte Zellen werden durch Evans-Blau rot gegengefärbt.
11.3.2 Interpretation der Ergebnisse
Eine positive Diagnose wird gestellt, wenn mindestens eine fixierte Zelle nach der Anfärbung das in
Abschnitt 11.3.1 beschriebene Fluoreszenzmuster aufweist.
Ein negatives Ergebnis sollte erst dann registriert werden, wenn in der untersuchten Zellkultur mindestens
50 nicht infizierte Zellen vorliegen. Sollten zu wenig Zellen vorhanden sein, siehe Abschnitt 11.3.3.
11.3.3 Zu wenig Zellen
Falls auf dem Objektträger zu wenig Zellen vorhanden sind, wird der Rest der klinischen Probe 10 Minuten
bei 200 g und Raumtemperatur (15-30 °C) zentrifugiert. Die Zellen werden in einer kleineren Menge PBS
resuspendiert (25 µL), bevor sie wieder in der Vertiefung des Objektträgers aufgebracht werden.
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