IMAGEN™ Adenovirus - Oxoid

Mettre des aliquotes de 25µL de suspension cellulaire dans les chaque puits des lames. Laisser sécher
complètement à l'air libre et fixer dans de l'acétone frais, à température ambiante (15-30 °C), pendant 10
minutes. S'il l'échantillon n’est pas marqué immédiatement, le conserver à 4 °C pendant la nuit, ou le
congeler à –20 °C pour des périodes plus longues.
10 MODE OPERATOIRE
VEUILLEZ CONSULTER LA SECTION 8.2, PRÉCAUTIONS TECHNIQUES, AVANT DE RÉALISER LE
TEST.
10.1 ADDITION DE REACTIF
Ajouter 25µL de réactif dans chaque puits de 6 mm. . Vérifier si le réactif couvre toute la surface du puits.
10.2 PREMIERE INCUBATION
Incuber les lames avec le réactif pendant 15 minutes à 37 °C, dans une chambre humide. Ne pas laisser
sécher le réactif sur l'échantillon, car cela provoquerait l'apparition d'un marquage non-spécifique.
10.3 LAVAGE DE LA LAME
Eliminer l'excès de réactif par lavage avec la solution saline (PBS), et laver la lame avec précaution dans
un bain à agitation contenant du PBS, pendant 5 minutes. Laisser égoutter le PBS et laisser sécher la lame
à l'air libre et à température ambiante (15-30 °C).
10.4 ADDITION DE LIQUIDE DE MONTAGE
Ajouter une goutte de liquide de montage IMAGEN Adénovirus au centre de chaque puits et placer une
lamelle, en évitant la formation de bulles d'air sous la lamelle.
10.5 LECTURE DE LA LAME
Examiner le puits contenant l'échantillon coloré dans son ensemble, en utilisant un microscope à
épifluorescence. Comme indiqué à la Section 11, une amplification de x200-x500 permet de visualiser la
fluorescence. (Pour obtenir des résultats optimaux, les échantillons doivent en principe être examinés
immédiatement après le marquage, mais ils peuvent être conservés entre 2 et 8 °C, à l'abri de la lumière,
jusqu'à 24 heures).
11 INTERPRETATION DES RESULTATS
11.1 CONTRÔLES
11.1.1 Lames de contrôle positif
Une fois colorée et examinée conformément aux instructions de la Section 10, la lame de contrôle positif
doit présenter des cellules avec une fluorescence nucléaire et/ou cytoplasmique intracellulaire vert-pomme,
contrastant avec la couleur rouge du contre-colorant. Ces cellules sont légèrement plus grandes que les
cellules épithéliales respiratoires ou conjonctives, mais présentent une fluorescence intracellulaire,
cytoplasmique et/ou nucléaire similaire lorsqu'elles sont contaminées par un adénovirus. Les lames de
contrôle positif doivent servir à vérifier si la procédure de marquage a été réalisée correctement.
18/37 K6100EFG