THESE UNIQUE El Hassane Kéhien-Piho TOU - Nutridev

Matériels et méthodes
(1988). Les cendres totales ont été déterminées par minéralisation au four à 530°C. Les
glucides totaux ont été calculés par différence. La valeur énergétique théorique de la bouillie a
été calculée en prenant 4 kcal/g comme coefficient de conversion pour les protéines et les
glucides et 9 kcal/g comme coefficients de conversion pour les lipides.
III.1.6. Dosage des phytates par HPIC
Principe
La chromatographie ionique à haute performance (HPIC) est une technique de dosage des
ions par couplage échange d’ions et détection conductimétrique. La séparation se fait sur
colonne échangeuse d’anions ou cations. L’éluant est généralement de composition chimique
simple : acide méta-sulfonique pour les cations, hydroxyde de sodium pour les anions. Un
module de suppression ou de neutralisation, neutralise chimiquement les ions provenant de
l’éluant.
Extraction des phytates
L’extraction des phytates se fait à l’acide chlorhydrique: 100 mg d’échantillon lyophilisé et 5
ml d’acide chlorhydrique 0,5N sont placés dans des béchers d’eau bouillante pendant 6 min
sous agitation. La première minute sert à atteindre la température d’extraction à l’intérieur du
tube et durant les 5 minutes restantes a lieu l’extraction. Le mélange est ensuite centrifugé
pendant 20 minutes à 4000 rpm, le surnageant est recueilli et repris dans 1,5 ml d’acide
chlorhydrique concentré. Le mélange est évaporé sous vide à 40°C pendant une nuit (Speed
Vac RC 10.10). Le culot obtenu est stocké à 4°C jusqu’au dosage.
Dosage par HPIC
Au cours des 10 minutes qui précèdent l’injection de la préparation dans le chromatographe,
le culot est repris dans 2 ml d’eau millipore et filtrée (Acrodisc de 0,2µm). Le filtrat obtenu
est dilué au 1/25 et 50 µl sont passés sur une colonne échangeuse d’anions Omnipac pax-100
(25 cm x 4 mm I.D) équipée d’une pré colonne Omnipac pax-100 (8µm) et d’un suppresseur
d’anions (AMMS* III4-mm). La séparation est assurée par un gradient d’élution composé de
trois solvants : NaOH, isopropanol, eau.
III.1.7. Dosage des mono- diholosides et des α-galactosides
L’extraction des oses contenus dans les échantillons se fait à l’éthanol : 80 mg d’échantillon
lyophilisé et 3 ml de solution d’éthanol à 80% sont mis au bain-marie à 90°C sous agitation
durant 30 minutes. Le mélange est centrifugé pendant 15 minutes à 4000 rpm à 4°C, le
surnageant est recueilli et mis de côté. Le culot est repris dans 3 ml d’éthanol à 80°C et
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