Trousse IFA Anaplasma phagocytophilum IgM Caractéristiques des ...

Trousse IFA Anaplasma phagocytophilum
IgM
Code produit : IF1450M
Rév. C
Caractéristiques des performances
SPÉCIFICITÉ
Ne pas diffuser aux États-Unis
Deux investigateurs externes et un investigateur interne ont
évalué la spécificité du test à l'aide d’un total de
85 échantillons de sérum : 60 échantillons provenant de
régions non endémiques et 25 échantillons provenant d’une
région endémique. Tous les échantillons de sérum provenaient
de donneurs non exposés. Le test d’immunofluorescence (IFA)
Anaplasma phagocytophilum IgM de Focus était négatif pour
100 % (45/45) des échantillons provenant de régions
endémiques et non endémiques européennes. Parmi les
échantillons provenant de régions non endémiques des États-
Unis, le test d’immunofluorescence (IFA) Anaplasma
phagocytophilum IgM de Focus était négatif pour 97,5 %
(39/40) des cas.
Spécificité chez les donneurs de sang
Population % Négatif IC à 95 %
Région endémique (Slovénie) 100 % (25/25)†
86,3-100 %
Région non endémique
(France)
100 % (20/20)
83,2-100 %
Région non endémique
(États-Unis)
97,5 % (39/40)
86,8-99,9 %
† Un échantillon coté comme négatif présentait une réactivité non spécifique.
SENSIBILITÉ
Sensibilité chez des patients positifs par PCR/frottis
sanguin en fonction du temps
Un investigateur externe a évalué la sensibilité à l'aide de
trente échantillons de sérum provenant de quinze patients
ayant été diagnostiqués avec une infection par Anaplasma
phagocytophilum. Le diagnostic de l’infection par Anaplasma
phagocytophilum était fondé sur les critères suivants :
1) maladie fébrile aiguë, et
2) morsure de tiques du genre Ixodes dans une région
endémique, et
3) confirmation en laboratoire (positif par PCR et/ou
frottis sanguin).
La PCR était spécifique de l’ADNr 16S d’Anaplasma
phagocytophilum et a été décrite par Chen et al. 1 . Les frottis
sanguins étaient décrétés positifs si des morulas
intracytoplasmiques pouvaient être identifiées dans le sang, la
moelle osseuse ou le LCR. La sensibilité a été stratifiée selon
le nombre de jours depuis le début des symptômes. Parmi les
trente échantillons, 14 avaient été prélevés moins de 60 jours
après le début des symptômes, 13 plus de 60 jours après, et
trois ont été prélevés à une période indéterminée après le début
des symptômes. Le test IFA Anaplasma phagocytophilum IgM
de Focus a présenté la sensibilité suivante :
Moins de 60 jours : parmi les quatorze échantillons prélevés
moins de 60 jours après le début des symptômes, 71,4 %
(10/14) étaient positifs.
Plus de 60 jours : parmi les treize échantillons prélevés plus
de 60 jours après le début des symptômes, 7,7 % (1/13) étaient
positifs.
Inconnu : parmi les trois échantillons prélevés à une période
indéterminée après le début des symptômes, 100 % (3/3)
étaient positifs.
Sensibilité chez des patients positifs par PCR/frottis
sanguin en fonction du temps
Période depuis le début des % Positif IC à 95 %
symptômes
Moins de 60 jours 71,4 % (10/14)
41,9-91,6 %
Plus de 60 jours 7,7 % (1/13)
0,2-36,0 %
Inconnu 100,0 % (3/3)
29,2-100 %

FOCUS Diagnostics
Sensibilité avec des échantillons appariés de sérum
Un investigateur externe a évalué la sensibilité à l'aide de
15 paires d’échantillons de sérum prélevés à un intervalle d’au
moins deux semaines chez 15 patients ayant été diagnostiqués
avec une infection par Anaplasma phagocytophilum. Le
diagnostic de l’infection par Anaplasma phagocytophilum
était fondé sur les critères suivants :
1) symptômes cliniques compatibles avec une infection par
Anaplasma phagocytophilum et
2) un changement d’un facteur quatre ou plus du titre
d’Anaplasma phagocytophilum, déterminé à l'aide d'un
test IFA IgG développé par l'investigateur.
Les symptômes cliniques comprenaient une maladie fébrile,
des antécédents de morsure de tique, une leucopénie, une
thrombocytopénie et/ou un taux élevé de transaminase
hépatique. Le test IFA IgG développé par l'investigateur a été
décrit par Nicholson, et al. 2 . Parmi les 15 paires d'échantillons
de sérum, 11 paires avaient présenté une augmentation d’un
facteur 4 dans le test IFA IgG développé par l'investigateur
(phase aiguë), et quatre paires avaient présenté une diminution
d’un facteur 4 dans ce même test (phase convalescente). Parmi
les 11 paires d'échantillons de sérum ayant présenté une
augmentation d’un facteur 4, le test IFA Anaplasma
phagocytophilum IgG de Focus était positif dans 9,1 % (1/11)
des échantillons du premier prélèvement et dans 72,7 % (8/11)
des échantillons du deuxième prélèvement. Parmi les quatre
paires d'échantillons ayant présenté une diminution d’un
facteur 4 dans le test IFA développé par l'investigateur, le test
IFA Anaplasma phagocytophilum IgG de Focus n’était positif
dans aucun des échantillons du premier tant que du deuxième
prélèvement.
Sensibilité avec des échantillons appariés de sérum
1 er prélèvement 2 ème prélèvement
IFA IgG
développé par
l'investigateur
IgG
croissant
IgG
décroissant
% Positif IC à
95 %
9,1 % (1/11)
0,2-41,3 %
0,0 % (0/4)
0,0-60,2 %
% Positif IC à
95 %
72,7 % (8/11)
39,0-94,0 %
0,0 % (0/4)
0,0-60,2 %
RÉACTIONS CROISÉES
Deux investigateurs externes ont évalué les réactions croisées
en sélectionnant des échantillons de sérum de patients
Anaplasma phagocytophilum IFA IgM
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symptomatiques et positifs pour l’agent de réaction croisée
potentiel.
Réactions croisées
Agent à réaction antigénique % Positif IC à 95 %
croisée
Encéphalite transmise par les
tiques
0,0 % (0/15)
0,0-21,8 %
Fièvre boutonneuse
méditerranéenne (Rickettsia
conorii)
Fièvre Q aiguë (Coxiella
burnetii)
Borréliose - maladie de Lyme
(Borrelia burgdorferi) **
Endocardite à Bartonella
quintana
0,0 % (0/25)
0,0-13,7 %
0,0 % (0/10)
0,0-30,8 %
0,0 % (0/36)
0,0-9,7 %
0,0 % (0/10)
0,0-41,0 %
** Des cas de co-infection avec Borrelia burgdorferi et Anaplasma
phagocytophilum ont été reportés. 3
STABILITÉ
Un investigateur interne a évalué la stabilité. Les constituants
ont été soumis à un vieillissement accéléré équivalent à un et
deux ans à une température comprise entre 2 et 8 ºC. Les
constituants soumis au vieillissement accéléré ont ensuite été
testés selon la notice de l'emballage, en parallèle avec des
constituants non soumis à ce vieillissement. Les constituants
sont considérés stables s’ils remplissent les critères de CQ
précisés dans la notice de l'emballage. Le produit a été jugé
stable après le vieillissement accéléré correspondant à un et
deux ans.
REPRODUCTIBILITÉ
Reproductibilité intra-essai et inter-essai
Un investigateur interne a évalué la reproductibilité intra-essai
et inter-essai. Dix échantillons de sérum de patients ont été
testés sur trois lames différentes au cours de cinq jours
(n = 150). Quatre échantillons étaient positifs, un était à la
limite de détection et cinq étaient négatifs. Les résultats de
tous les échantillons se sont situés dans une plage d’une
dilution de facteur deux.
Reproductibilité inter-lot
Un investigateur interne a évalué la reproductibilité inter-lot.
Dix échantillons de sérum de patients ont été testés sur trois
lots de lames (n = 30). Quatre échantillons étaient positifs, un
était à la limite de détection et cinq étaient négatifs. Les
résultats de tous les échantillons se sont situés dans une plage
d’une dilution de facteur deux.
RÉFÉRENCES
1. Chen S-M, Dumler JS, Bakken JS, Walker DH. Identification of a
Granulocyto tropic Ehrlichia Species as the Etiological Agent of Human
Disease. J Clin Micro 1994; 32: 589-595.
2. Nicholson WL, Comer JA, Sumner JW, et al. An indirect
immunofluorescence assay using a cell culture-derived antigen for
detection of antibodies to the agent of human granulocytic ehrlichiosis.
J Clin Microbiol 1997; 35: 1510-16.
3. Nedelman, RB et al. Simultaneous Human Granulocytic Ehrlichiosis
and Lyme Borrleiosis. N Engl J Med 1997;337:27-30.

FOCUS Diagnostics
Anaplasma phagocytophilum IFA IgM
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Date de rédaction : 27 janvier
2011
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