Oncognse des tumeurs respiratoires et urognitales - Service d ...

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urothéliale. Utilisant à partir du 15 ème jour nous avons réalisé des cultures à confluence nous avons
réalisé des blessures circulaires de 4 mm de diamètre la régénération a été étudiée dans un milieu
défini grâce à un analyseur d'images à 4, 24 et 28 heures. La prolifération a été étudiée par
incorporation de Brdu et l'expression des facteurs de croissance par RT-PCR. Le rôle du récepteur à
l'EGF a été étudié utilisant des anticorps bloquants ainsi que des inhibiteurs de l'activité tyrosine
kinase de ce récepteur (AG1478). Nous avons étudié le rôle de l'amphiréguline de l'EGF du TGF-α et
de l'HBEGF à des doses réceptives de 20 ng/ml, 100 ng/ml ml, 20 ng/ ml et 20 ng/ml. Dans ce modèle
la cicatrisation spontanée est obtenue en 48 heures. Elle est inhibée par l'AG418 et les anticorps de 50
et 30 % respectivement. Cette inhibition s'accompagne d'une inhibition de la prolifération et de la
migration cellulaire. La régénération est marquée par une augmentation de production de gène
HBEGF au niveau des ARN sans changement au niveau de la quantité du récepteur. Cette cicatrisation
est accélérée par l'addition exogène de TFG-α HB-EGF et TGF-α. Il n'y a pas d'effet de l'EGF par luimême.
Ces résultats montrent qu'il existe une boucle autocrine impliquant le récepteur à l'EGF et l'HBEGF
dans la cicatrisation urothéliale et que le récepteur à l'EGF est donc une cible potentielle pour contrôler
la prolifération des cellules urothéliales
Figure 1 : Effet d’un inhibiteur de l’EGFR (AG1478) sur la cicatrisation urotheliale
A
4h
B
24h
C
48h
Serum free
D
E
F
AG1478
IV 1. 2.2 - Modèle in vitro de la thérapie ciblée des tumeurs urothéliales sur le récepteur à l'EGF
La surexpression du récepteur à l'EGF au cours de la cancérogénèse et de la progression des tumeurs
urothéliales est bien établie. Nous avons mis en évidence une relation entre la surexpression du
récepteur à l'EGF et la prolifération cellulaire ainsi que le pronostic. Nous avons également établi une
lignée cellulaire qui présente une amplification du gène de récepteur et qui répond aux facteurs de
croissance de la famille de l'EGF (lignée 1207). Ces éléments associés au rôle du récepteur à l'EGF
dans la cicatrisation urothéliale nous a amené à étudié le rôle des inhibiteurs spécifiques du récepteur à
l'EGF comme thérapeutiques potentielles dans le cancer urothéliale. En collaboration avec les
laboratoires Astra Zeneca, nous avons étudié les faits du Gefitinib (Iressa). Nous avons étudié
l'expression des récepteurs Erb-B (1, 2 et 3) sur 6 lignées cellulaires (D24, J82, RT112, SD 24 SD148
10-07). Il existe une corrélation entre le niveau d'expression des transcrits et le niveau des protéines.
Parmi les ligands exprimés de façon endogène par ces lignées cellulaires, le TGF-α, l' HEBGF et
l'amphériguline sont les plus importants. L'EGF est peu ou pas exprimé. L'Epiréguline est exprimé
dans SD24 et SD148. Nous avons observé en utilisant deux inhibiteurs l'AG14 78 et le ZT 18 39, un
effet significatif sur la prolifération est observé avec les lignées 64 7V et 1207. Ces résultats montrent
alors qu'il existe un effet dose du ZT 18 89 sur la lignée 1207 avec une IC50 à 0,25 µM. Cette
diminution de la prolifération s'associe à une augmentation de la proportion des cellules en phase GA.
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