MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion
partielle des bains de nettoyage et faciliter le traitement ultérieur de ces effluents. Nous avons donc
souhaité conduire une analyse des effluents dans ce sens. Pour cela, les effluents du nettoyage sont
maintenus 60 minutes à température ambiante avant d’être chauffés à 100°C pendant 10 minutes.
La confrontation des résultats obtenus sur les supports à ceux obtenus sur les effluents est primordiale.
Ceci est d’autant plus vrai que l’on s’intéresse à l’efficacité des procédés de nettoyage qui consistent à
déplacer une salissure d’une surface vers la solution de nettoyage (l’effluent).
Sur un plan méthodologique, cette comparaison nous a permis de confirmer des points critiques de la
méthodologie, notamment l’agitation mécanique. Lors d’un de nos essais, aucun des procédés de
nettoyage testés ne présentaient d’efficacité quelconque vis-à-vis de la protéine prion. Peu de différence
d’efficacité était observé entre le double nettoyage par l’Aniosyme N2 et celui par l’Aniosyme DD1. Le
nettoyage par l’eau du réseau (H 2 Or) lui-même semblait plus efficace puisque l’intensité du signal était
légèrement plus faible (figure III-18(a)).
(a)
NaClO
N2
N2
DD1
DD1
H 2 0r
(b)
Inhibition
des enzymes
H 2 0r
Eff. N2
Eff. DD1
t 60 t 0 t 60
t 0
H 2 0r
Figure III-18 : Western blot de la PrP (a) Détection de la PrP résiduelle sur support, (b) Détection
de la PrP dans les effluents du nettoyage
Afin de vérifier que la salissure avait bien été déplacée des supports vers les effluents, nous avons donc
procédé à l’analyse de ces effluents par Western blot. La radiographie de cette analyse est présentée sur la
figure III-18(b). Les résultats mettent en évidence la présence de PrPsc dans les effluents de l’eau du
réseau (H 2 0r). En revanche, la quantité de PrP est très faible dans les effluents des formulations
Aniosyme N2 et DD1, même lorsque l’activité enzymatique est inhibée tout de suite après la phase de
nettoyage (t 0 ). La mise en commun des résultats obtenus sur support et dans les effluents nous permet
donc de conclure au déplacement de la salissure par l’eau du réseau. En revanche, les formulations
Aniosyme N2 et DD1 n’ont pas permis un tel déplacement. Sachant que l’eau du réseau n’est pas
reconnue pour son activité détergente (à température ambiante), nous avons conclu à un biais
méthodologique identifié au niveau de l’hétérogénéité de l’agitation entre les essais. Cette analyse nous a
donc non seulement permis d’optimiser nos conditions opératoires, mais elle nous a également évité une
interprétation erronée de nos résultats.
Pour la compréhension des résultats obtenus sur support, l’étude des effluents nous a permis notamment
de corroborer l’existence d’une sensibilité de la protéine prion aux protéases. Cette sensibilité semble
également fonction de la composition des formulations. Nous avons précédemment observé une
différence de sensibilité des souches animales à la digestion enzymatique avec notamment une sensibilité
acquise pour la souche C506M3. L’analyse des effluents nous a permis de confirmer cette hypothèse. La
figure III-19 présente les radiographies des Western blot réalisés à partir des effluents du 1 er nettoyage sur
les souches C506M3 (figure III-19 (a)) et 263K (figure III-19((b)).
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