MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion
principes actifs antimicrobiens sur les surfaces et l’adsorption réversible de l’ammonium quaternaire suite
au rinçage. Or, les principes actifs antimicrobiens de l’Aniosyme DD1 étant le biguanide et l’ammonium
quaternaire. Il est plus que probable que le biguanide soit responsable de la rétention de la protéine prion.
De plus, en s’adsorbant de façon irréversible, il « inhiberait » l’efficacité du 2 nd nettoyage par l’Aniosyme
N2. La circulaire 591 relative aux modalités de traitement manuel pour la désinfection des endoscopes
non autoclavables autorise l’utilisation de détergents/désinfectants si ces formulations sont exemptes
d’aldéhyde. Compte tenu de nos observations, il semble que les aldéhydes ne soient pas les seuls
principes actifs antimicrobiens à avoir des effets néfastes sur l’efficacité de la détergence des protéines et
notamment des prions.
Concernant la durée de la phase de désinfection, elle ne semble pas avoir d’incidence majeure sur
l’efficacité du procédé. Les radiographies des Western blot présentées pour les souches 263K et 22L
montrent néanmoins une diminution significative du signal lorsque celles-ci subissent une désinfection de
30 minutes après le double nettoyage par les Aniosyme DD1 puis N2, comparativement à une
désinfection de 15 minutes. Cependant, ces résultats n’ont pas été reproduits lors des essais de
confirmation. Ceci conforte donc le fait que la désinfection ne participe pas à l’efficacité du nettoyage.
Corrélée aux observations précédentes sur la présence de désinfectants dans les formulations de
nettoyage, il semble même que la désinfection puisse compromettre l’efficacité de la détergence. Mafu
Akier Assanta du Centre de Recherche et de Développement sur les Aliments d’agriculture et
agroalimentaire de St Hyancinthe au Canada a écrit : « Un nettoyage sans désinfection ultérieure vaut
mieux qu’une désinfection sans nettoyage préalable ».
En résumé :
Le double nettoyage utilisant l’Aniosyme N2 en première intention est efficace visà-vis
de la PrPsc en milieu lipidique cérébral indépendamment de la souche
animale et du type de PrP humaine.
La souche C506M3 acquiert une sensibilité aux traitements enzymatiques à la suite
du premier nettoyage.
L’aniosyme DD1 compromet les performances de l’Aniosyme N2 lorsqu’il est
utilisé en première intention, suggérant un rôle inhibiteur des principes actifs
antimicrobiens dans le procédé de nettoyage.
L’étape de désinfection n’optimise pas l’efficacité du procédé.
Les effluents du nettoyage :
L’analyse des effluents du nettoyage permet non seulement de s’assurer du déplacement de la PrP de la
surface du support, vers la solution de nettoyage, mais également de compléter l’interprétation des
résultats obtenus sur les fils.
En raison de la présence d’enzymes dans les formulations Aniosyme N2 et DD1, il est nécessaire
d’inhiber leur activité immédiatement après le nettoyage afin de ne pas introduire de biais dans la
détection de la PrP dans les effluents. En effet, bien que la PrPsc soit partiellement résistante aux
protéases, les influences conjointes des tensioactifs et du temps peuvent conduire à une dégradation
complète de la PrPsc. Lors de la phase d’optimisation de la méthode, nous avions effectivement constaté
une activité enzymatique importante dans la formulation N2 conduisant à la disparition du signal de la
PrPres d’un homogénat cérébral en fonction du temps (résultats non présentés). L’activité enzymatique
est donc inhibée immédiatement après le nettoyage par chauffage des effluents à 100°C pendant 10
minutes.
D’un autre côté, il est tout de même intéressant de prendre en considération la dégradation de la PrPsc par
les enzymes dans les effluents du nettoyage. Celle-ci pourrait effectivement participer à une inactivation
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