MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

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Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion une augmentation conséquente du nombre d’essais par souche et par procédé. C’est pourquoi, nous conduirons la validation des procédés de nettoyage et de désinfection sans traitement à protéinase K, ce dernier n’étant mené que pour vérifier la spécificité de la PrPsc. Efficacité des procédés de nettoyage et de désinfection vis-à-vis des protéines prion humaines et animales: Compte tenu de la reproductibilité des résultats obtenus sur les trois procédés de nettoyage vis-à-vis des différentes protéines prion, nous proposons de valider ces procédés en prenant la phase de désinfection en considération. Un procédé de nettoyage supplémentaire est néanmoins ajouté : il s’agit du double nettoyage par l’Aniosyme DD1 puis par l’Aniosyme N2. L’Aniosyme DD1 étant un nettoyant prédésinfectant peu efficace en double nettoyage vis-à-vis de la protéine prion, il est possible que l’Aniosyme N2 en seconde intention permette d’améliorer l’efficacité du procédé compte tenu des performances de cette formulation. Cela permettrait donc de procéder au double nettoyage des DM avec une phase de pré-désinfection dès la première séquence. La formulation désinfectante sélectionnée pour la validation in vitro des procédés de nettoyage et de désinfection est l’Anioxy Twin Cu (ATC). Deux temps de contact sont évalués pour la phase de désinfection. Bien que les désinfectants ne soient pas reconnus pour leur activité détergente, cela nous permet d’une part de déterminer l’incidence de la durée de la désinfection sur les procédés et d’autre part, de s’assurer d’une certaine reproductibilité du procédé. Parallèlement aux procédés, deux essais contrôles sont réalisés. Le premier consiste à traiter les fils d’acier inoxydable souillés par une solution d’hypochlorite de sodium (NaClO) à 2% pendant une heure à température ambiante. Le second contrôle négatif des procédés consiste à traiter les fils uniquement par l’eau du réseau servant aux dilutions des formulations. Les radiographies des Western blot obtenus pour chacun des procédés évalués et pour chacune des souches étudiées sont présentées sur la figure III-17. Ces résultats, obtenus dans le cadre de la validation des procédés de nettoyage et de désinfection sont identiques à ceux précédemment obtenus sur les procédés du double nettoyage. Les procédés mettant en oeuvre l’Aniosyme N2 dès la première séquence du nettoyage se montrent efficaces vis-à-vis des PrPsc en milieu lipidique cérébral, et ce indépendamment des souches testées. Le procédé de nettoyage, introduit dans cette partie de l’étude et consistant en un double nettoyage par les Aniosyme DD1 puis N2, semble se montrer efficace sur la souche C506M3 alors qu’il ne l’est pas sur les autres souches. Ce résultat est en accord avec les observations faites précédemment sur la sensibilité de cette souche à la digestion enzymatique. En effet, sur la figure III-16, nous avions observé qu’après nettoyage par l’Aniosyme DD1, la souche semblait devenir sensible à la digestion enzymatique puisque qu’elle n’était plus détectée après le traitement par la protéinase K. De plus, nous avons pu observer une forte activité enzymatique de l’Aniosyme N2 sur la PrPsc (figure III-15). Compte tenu de ces observations, il est possible que le 1 er nettoyage avec l’Aniosyme DD1 facilite la dégradation enzymatique de la PrP de la souche C506M3 lors du 2 nd nettoyage par l’Aniosyme N2. - 88 -
Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion ATC 15 min 30 min -NaClO - N2 N2 DD1 DD1 N2 DD1 N2 DD1 + - + - + - + - - + - + - + - + H 2 0r - - vMCJ MCJs 6PB1 263K C506M3 22L Figure III-17 : Détection indirecte par Western blot de la protéine prion résiduelle des différentes formes humaines et animales ayant subit les procédés du double nettoyage par les Aniosyme N2 et DD1 ainsi qu’une phase de désinfection de 15 ou 30 minutes par l’Anioxy Twin Cu (ATC). Les contrôles NaClO 2% et H 2 0r sont inclus. Cependant, si ce procédé semble être efficace sur la souche C506M3, il n’en est pas ainsi pour les autres souches. En effet, le double nettoyage par les Aniosyme DD1 puis N2 ne se montre pas significativement plus performant que le double nettoyage par l’Aniosyme DD1. Compte tenu des performances observées pour l’Aniosyme N2, cela porte à croire que l’utilisation de l’Aniosyme DD1 en première intention « inhiberait » l’efficacité de l’Aniosyme N2. De plus, l’efficacité du double nettoyage par l’Aniosyme DD1 en première intention est rarement supérieure, voir même souvent inférieure, à l’efficacité de l’eau du réseau. Il semble donc que l’Aniosyme DD1 favorise plutôt la rétention de la PrP sur les surfaces que sa désorption. La présence de principes actifs antimicrobiens et notamment de biguanide pourrait être à l’origine de ce problème. En effet, dans le chapitre II, nous avons mis en évidence la rémanence des - 89 -
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N° d’ordre 2006-21 Année 2006 T
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SOMMAIRE INTRODUCTION GENERALE CHAP
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