MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion
une augmentation conséquente du nombre d’essais par souche et par procédé. C’est pourquoi, nous
conduirons la validation des procédés de nettoyage et de désinfection sans traitement à protéinase K, ce
dernier n’étant mené que pour vérifier la spécificité de la PrPsc.
Efficacité des procédés de nettoyage et de désinfection vis-à-vis des protéines prion
humaines et animales:
Compte tenu de la reproductibilité des résultats obtenus sur les trois procédés de nettoyage vis-à-vis des
différentes protéines prion, nous proposons de valider ces procédés en prenant la phase de désinfection en
considération. Un procédé de nettoyage supplémentaire est néanmoins ajouté : il s’agit du double
nettoyage par l’Aniosyme DD1 puis par l’Aniosyme N2. L’Aniosyme DD1 étant un nettoyant prédésinfectant
peu efficace en double nettoyage vis-à-vis de la protéine prion, il est possible que
l’Aniosyme N2 en seconde intention permette d’améliorer l’efficacité du procédé compte tenu des
performances de cette formulation. Cela permettrait donc de procéder au double nettoyage des DM avec
une phase de pré-désinfection dès la première séquence.
La formulation désinfectante sélectionnée pour la validation in vitro des procédés de nettoyage et de
désinfection est l’Anioxy Twin Cu (ATC). Deux temps de contact sont évalués pour la phase de
désinfection. Bien que les désinfectants ne soient pas reconnus pour leur activité détergente, cela nous
permet d’une part de déterminer l’incidence de la durée de la désinfection sur les procédés et d’autre part,
de s’assurer d’une certaine reproductibilité du procédé. Parallèlement aux procédés, deux essais contrôles
sont réalisés. Le premier consiste à traiter les fils d’acier inoxydable souillés par une solution
d’hypochlorite de sodium (NaClO) à 2% pendant une heure à température ambiante. Le second contrôle
négatif des procédés consiste à traiter les fils uniquement par l’eau du réseau servant aux dilutions des
formulations.
Les radiographies des Western blot obtenus pour chacun des procédés évalués et pour chacune des
souches étudiées sont présentées sur la figure III-17.
Ces résultats, obtenus dans le cadre de la validation des procédés de nettoyage et de désinfection sont
identiques à ceux précédemment obtenus sur les procédés du double nettoyage. Les procédés mettant en
oeuvre l’Aniosyme N2 dès la première séquence du nettoyage se montrent efficaces vis-à-vis des PrPsc
en milieu lipidique cérébral, et ce indépendamment des souches testées.
Le procédé de nettoyage, introduit dans cette partie de l’étude et consistant en un double nettoyage par les
Aniosyme DD1 puis N2, semble se montrer efficace sur la souche C506M3 alors qu’il ne l’est pas sur les
autres souches. Ce résultat est en accord avec les observations faites précédemment sur la sensibilité de
cette souche à la digestion enzymatique. En effet, sur la figure III-16, nous avions observé qu’après
nettoyage par l’Aniosyme DD1, la souche semblait devenir sensible à la digestion enzymatique puisque
qu’elle n’était plus détectée après le traitement par la protéinase K. De plus, nous avons pu observer une
forte activité enzymatique de l’Aniosyme N2 sur la PrPsc (figure III-15). Compte tenu de ces
observations, il est possible que le 1 er nettoyage avec l’Aniosyme DD1 facilite la dégradation
enzymatique de la PrP de la souche C506M3 lors du 2 nd nettoyage par l’Aniosyme N2.
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