MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

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Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion nettoyage, les intensités du signal pour ces deux souches étant plus importantes que celles observées pour les autres souches, comparativement au témoin d’adsorption. Ces observations sont néanmoins insuffisantes pour conclure à un effet de souche. Pour les raisons de spécificité de la détection précédemment évoquées, des essais, menés en parallèle, ont subit un traitement à la protéinase K (figure III-16(b)). La comparaison des radiographies obtenues avec ou sans un traitement à la protéinase K permet d’observer des résistances plus ou moins importantes des souches vis-à-vis de la digestion enzymatique. Notons que tous les types et toutes les souches de PrP ont été traités dans les mêmes conditions (par 7,5 µg de protéinase K pendant une heure à 37°C). Si la PrPsc humaine du vMCJ (figure III-13) et de la MCJs ainsi que la souche 263K sont relativement résistantes à la protéinase K, la souche 6PB1 y est particulièrement sensible. La souche C506M3 ne montre pas de résistance particulière lorsqu’elle est éluée à partir du contrôle de l’adsorption, qui ne subit aucun procédé. En revanche, lorsqu’elle subit un double nettoyage par l’Aniosyme DD1 puis une digestion enzymatique à la protéinase K, le signal de la PrPres disparaît. Il est donc possible que le double nettoyage ait sensibilisé la protéine prion de cette souche à la digestion enzymatique. - 86 -
Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion (a) Protéinase K - (b) Protéinase K + N2 N2 N2 N2-DD1 DD1-DD1 2 log 2.6 log N2 N2 N2 N2-DD1 DD1-DD1 2 log 2.6 log MCJs 6PB1 263K C506M3 22L Figure III-16 : Détection indirecte par Western blot de la protéine prion résiduelle du MCJs et des souches animales 6PB1, 263K, C506M3 et 22L. (a) sans traitement des fils à la protéinase K, (b) après traitement des fils à la protéinase K. NB : les résultats sont discordants pour le double nettoyage par l’Aniosyme DD1 sur la salissure MCJs avec et sans traitement à la protéinase K. Le faible signal observé sans traitement à la protéinase K est un artéfact. Les résultats présentés sur la figure suivante le confirment. Ces données sur la sensibilité variable, intrinsèque ou acquise, des souches à la digestion enzymatique posent la question de savoir si une digestion à la protéinase K est réellement judicieuse dans la problématique qui est la nôtre. En effet, cette digestion, nous permettant de contrôler la spécificité de la détection représente un risque de faux négatifs, comme l’illustre la situation observée pour la souche C506M3. Il est néanmoins possible de minimiser ce risque en ayant recours à des digestions enzymatiques partielles par des concentrations croissantes de protéinase K [Fichet, et al. 2004]. Toutefois, cette option conduit à - 87 -
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N° d’ordre 2006-21 Année 2006 T
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