MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion
La gestion des informations à présent disponibles sur l’efficacité des procédés de nettoyage en fonction de
la nature de la salissure, est extrêmement complexe. En effet, des procédés apparemment performants sur
la PrP dans une salissure complexe s’avèrent partiellement inefficaces sur une salissure protéique. Quelle
salissure doit-on dès lors privilégier pour l’évaluation in vitro des procédés La salissure protéique
représente, sans aucun doute, le pire des scénarios et son utilisation devient pour cela particulièrement
intéressante. Mais à long terme, l’utilisation de telle salissure ne serait-elle pas un frein au développement
des formulations chimiquement inertes et potentiellement efficaces A l’heure actuelle, les essais in vivo
d’inoculation à l’animal ne sont mis en œuvre que lorsque l’efficacité du procédé est validée in vitro.
Dans ce contexte, l’association d’une salissure extrêmement résistante à une méthode de détection
particulièrement sensible va considérablement augmenter les exigences de performances des
formulations. Le point noir de ce système est qu’il risque de nous apprendre ce que l’on connaît déjà et de
nous conduire à développer des formulations toujours plus drastiques en terme d’agressivité chimique. Le
second argument en défaveur d’une salissure purement protéique est quelle n’est pas « réelle ». Même si
le plasma et les tissus périphériques sont nettement moins riches en lipides que le cerveau, ils ne sont pas
pour autant purement protéiques. Pourtant, de par la présence de lipides, il pourrait être reproché à la
salissure complexe, en milieu lipidique, de favoriser le nettoyage. Il est alors bien à propos de rappeler
que les travaux concernant l’inactivation des prions attribuent aux lipides un rôle protecteur. En effet, les
lipides augmenteraient la résistance des prions à l’inactivation et la stabilité de la PrPsc [Appel, et al.
2001]. De plus, il semble que les quantités de protéines adsorbées soient plus importantes en présence de
lipides [Rebeix, et al. 2000].
Tout en ayant conscience de la résistance de la PrPsc et de la PrPres aux procédés de nettoyage, nous
poursuivrons donc les évaluations des procédés vis-à-vis de la protéine prion dans un environnement
lipidique cérébral. Ce choix fut principalement motivé par la prise en compte des conditions opératoires
pour les essais in vivo d’inoculation à l’animal. En effet, les fils inoculés sont généralement souillés par
des homogénats de cerveau [Fichet, et al. 2004, Flechsig, et al. 2001, Jackson, et al. 1999, Yan, et al.
2004]. Ainsi, une homogénéité des méthodologies est assurée entre les essais in vitro et in vivo.
Efficacité des procédés de nettoyage vis-à-vis de la protéine prion de type 1 et vis-à-vis
de souches animales :
La nature des salissures influe sur l’efficacité d’un procédé. On peut également se demander, pour une
même salissure, si le type de protéine prion ou les souches de prion ont une incidence sur l’efficacité du
nettoyage.
Pour cela, nous avons testé les mêmes procédés que précédemment vis-à-vis de :
- la protéine prion de type 1 en milieu lipidique cérébral, provenant d’un cas de MCJs homozygote
Met/Met au codon 129 ;
- la protéine prion de quatre souches animales (tableau III-5), à partir d’homogénat de cerveau
20%.
Les radiographies des Western blot sont présentées sur la figure III-16 pour l’ensemble des types et
souches de protéine prion. La PrPsc résiduelle est mise en évidence uniquement lorsque le procédé
consiste en un double nettoyage par l’Aniosyme DD1 et ceci quel que soit le type ou la souche de
protéine prion adsorbée (figure III-16(a)). Ces résultats sont en parfait accord avec ceux obtenus sur la
PrPsc du vMCJ montrant une efficacité du procédé dès lors que l’Aniosyme N2 est utilisé au 1 er
nettoyage.
Lorsque les fils subissent un nettoyage efficace, la PrPsc résiduelle d’aucune des souches n’est mise en
évidence. Il ne semble donc pas y avoir d’effet de souche dans le nettoyage. Cependant, lorsque le
nettoyage est moins efficace (double nettoyage par l’Aniosyme DD1), des différences peuvent être
observées entre les souches. Il semble par exemple que les souches 6PB1 et 22L soient plus résistantes au
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