MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
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Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion<br />
pas différentes de celles observées pour le contrôle de l’adsorption. Cela pose donc la question de la part<br />
de l’activité enzymatique dans les procédés de nettoyage.<br />
En résumé, la faible sensibilité offerte par la salissure de PrPc et les interrogations concernant le rôle des<br />
enzymes dans le nettoyage compromet, en l’état actuel de nos connaissances, la possibilité d’une<br />
détection indirecte et spécifique de la PrPsc sans confirmation préalable par un traitement à la protéinase<br />
K.<br />
Efficacité des procédés de nettoyage vis-à-vis des salissures protéiques PrPsc et<br />
PrPres du vMCJ :<br />
Les méthodes précédentes : le PND, la méthode isotopique et la méthode de détection directe de la PrPres<br />
sur support, nous ont permis de constater une incidence possible de la nature de la salissure sur<br />
l’efficacité du procédé. En effet, des formulations présentant des PND élevés sur une salissure riche en<br />
lipides s’avéraient peu efficaces vis-à-vis d’une salissure protéique. Bien que ces salissures protéiques ne<br />
soient pas représentatives de la nature réelle des salissures, nous souhaitions vérifier ces observations visà-vis<br />
de la protéine prion. Nous avons donc évalué les procédés du double nettoyage par les Aniosyme N2<br />
et DD1 sur de la PrPsc et de la PrPres (partiellement) purifiées provenant du vMCJ.<br />
Les résultats sont présentés sur la figure III-15(a) pour la PrPsc et III-15(b) pour la PrPres.<br />
(a)<br />
PrPsc<br />
(b)<br />
PrPres<br />
N2-N2<br />
N2-DD1<br />
DD1-DD1<br />
2 log<br />
2.6 log<br />
vMCJ<br />
N2-N2<br />
N2-DD1<br />
DD1-DD1<br />
2 log<br />
2.6 log<br />
30 kDa<br />
27 kDa<br />
22 kDa<br />
30 kDa<br />
27 kDa<br />
22 kDa<br />
Figure III-15 : Détection indirecte de la PrPsc résiduelle (a) et de la PrPres résiduelles (b) du vMCJ<br />
par Western blot.<br />
Quel que soit le procédé du double nettoyage testé, la PrPsc résiduelle est détectée par Western blot. Une<br />
classification des performances est cependant possible. Le double nettoyage par l’Aniosyme N2 est plus<br />
efficace que le double nettoyage par les Aniosyme N2 et DD1, lui-même plus efficace que le double<br />
emploi de l’Aniosyme DD1.<br />
Dans le cas du double nettoyage par l’Aniosyme N2, nous constatons une digestion partielle de la PrPsc<br />
objectivée par une diminution des poids moléculaires de l’ensemble des glycoformes, donnant une allure<br />
caractéristique de la PrPres du vMCJ. Ceci témoigne d’une activité enzymatique des protéases contenues<br />
dans cette formulation. La PrP détectée est donc de la PrPres. Ce résultat nous permet également de<br />
suggérer une activité des protéases de la formulation, à la surface des supports, sur les protéines<br />
adsorbées.<br />
Pour le procédé Aniosyme N2 puis DD1, la diminution des masses moléculaires des glycoformes ne<br />
semble que partielle. Cette diminution n’étant pas observée pour le double nettoyage par l’Aniosyme<br />
DD1, ceci traduit une activité enzymatique plus ou moins efficace suivant la formulation puisque les<br />
concentrations et la nature des enzymes sont identiques pour les deux formulations.<br />
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