MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion
désorption de la PrP résiduelle est trop important, la sensibilité de la détection sera diminuée. Il est donc
nécessaire de disposer de support d’adsorption caractérisé par un rapport surface/volume élevé.
L’utilisation de courts segments de fils d’acier inoxydable de faible diamètre permet de répondre à ce
critère [Lemmer, et al. 2004]. Ces fils d’acier inoxydable étant également employés pour les essais in vivo
d’inoculation à l’animal, leur utilisation pour la validation des essais in vitro est d’autant plus pertinente.
Les types de PrP des maladies humaines
Dans le cadre des maladies humaines à prion, on ne parle pas de souches mais plutôt de types de PrP. Le
typage de la PrP est établit suivant son profil électrophorétique après digestion à la protéinase K (figure I-
4). En raison du problème de santé publique provoqué par l’émergence du vMCJ, de sa distribution
périphérique et de l’efficacité de sa transmission par le sang, les procédés doivent être évalués
prioritairement vis-à-vis de la PrP du vMCJ. Dans cette forme de MCJ, la PrPres est de type 2. Elle est
différenciée de la PrPres type 2 des formes sporadiques par sa bande biglycosylée majoritaire (figure I-4).
La forme des maladies à prions la plus courante est la forme sporadique de la MCJ (tableau I-2 : Forme
de Heidenhain). Ce phénotype de la MCJs est associé à la présence de PrPres de type 1 et à une
homozygotie Met/Met au codon 129 (Parchi 1996). Ainsi, l’évaluation des procédés sera également
réalisée à partir de PrP de type 1 provenant d’un patient homozygote Met/Met au codon 129.
L’adsorption sur fils d’inox à partir d’un simple homogénat de cerveau à 10% pour les formes humaines,
ne permet pas d’établir l’efficacité du procédé avec une sensibilité suffisamment importante. En effet,
lorsque la PrP, adsorbée à partir de cette salissure, est éluée des fils d’acier inoxydable et que l’éluât est
analysé en Western blot, la dernière dilution de l’éluât pour laquelle la PrP est observée est celle au
1/33 ème , correspondant à 1,5 log de PrP (figure III-9).
1 log
1.5 log
2 log
Figure III-9 : Limite de détection en Western blot de la PrP humaine adsorbée sur fils d’acier
inoxydable à partir d’un homogénat de cerveau 10%.
Evaluer l’efficacité des procédés sur 1,5 log n’est pas pertinent compte tenu des sensibilités offertes par
les essais in vivo sur l’animal. Il est vrai que travailler sur les formes humaines n’est pas toujours évident.
Contrairement aux souches animales qui sont stabilisées et titrées, la quantité de PrPsc dans les formes
humaines est variable et dépendante du patient. En effet, la quantité de PrPsc va varier en fonction du
stade de la maladie auquel est survenu le décès. Plus le stade sera avancé, plus la quantité de PrPsc sera
importante. Mais il faut également préciser que la répartition cérébrale de la PrPsc n’est pas homogène, la
quantité de PrPsc dans un homogénat d’une zone cérébrale donnée n’est donc pas représentative de la
quantité de PrPsc accumulée au cours du développement de la maladie.
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