MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion<br />
désorption de la PrP résiduelle est trop important, la sensibilité de la détection sera diminuée. Il est donc<br />
nécessaire de disposer de support d’adsorption caractérisé par un rapport surface/volume élevé.<br />
L’utilisation de courts segments de fils d’acier inoxydable de faible diamètre permet de répondre à ce<br />
critère [Lemmer, et al. 2004]. Ces fils d’acier inoxydable étant également employés pour les essais in vivo<br />
d’inoculation à l’animal, leur utilisation pour la validation des essais in vitro est d’autant plus pertinente.<br />
Les types de PrP des maladies humaines<br />
Dans le cadre des maladies humaines à prion, on ne parle pas de souches mais plutôt de types de PrP. Le<br />
typage de la PrP est établit suivant son profil électrophorétique après digestion à la protéinase K (figure I-<br />
4). En raison du problème de santé publique provoqué par l’émergence du vMCJ, de sa distribution<br />
périphérique et de l’efficacité de sa transmission par le sang, les procédés doivent être évalués<br />
prioritairement vis-à-vis de la PrP du vMCJ. Dans cette forme de MCJ, la PrPres est de type 2. Elle est<br />
différenciée de la PrPres type 2 des formes sporadiques par sa bande biglycosylée majoritaire (figure I-4).<br />
La forme des maladies à prions la plus courante est la forme sporadique de la MCJ (tableau I-2 : Forme<br />
de Heidenhain). Ce phénotype de la MCJs est associé à la présence de PrPres de type 1 et à une<br />
homozygotie Met/Met au codon 129 (Parchi 1996). Ainsi, l’évaluation des procédés sera également<br />
réalisée à partir de PrP de type 1 provenant d’un patient homozygote Met/Met au codon 129.<br />
L’adsorption sur fils d’inox à partir d’un simple homogénat de cerveau à 10% pour les formes humaines,<br />
ne permet pas d’établir l’efficacité du procédé avec une sensibilité suffisamment importante. En effet,<br />
lorsque la PrP, adsorbée à partir de cette salissure, est éluée des fils d’acier inoxydable et que l’éluât est<br />
analysé en Western blot, la dernière dilution de l’éluât pour laquelle la PrP est observée est celle au<br />
1/33 ème , correspondant à 1,5 log de PrP (figure III-9).<br />
1 log<br />
1.5 log<br />
2 log<br />
Figure III-9 : Limite de détection en Western blot de la PrP humaine adsorbée sur fils d’acier<br />
inoxydable à partir d’un homogénat de cerveau 10%.<br />
Evaluer l’efficacité des procédés sur 1,5 log n’est pas pertinent compte tenu des sensibilités offertes par<br />
les essais in vivo sur l’animal. Il est vrai que travailler sur les formes humaines n’est pas toujours évident.<br />
Contrairement aux souches animales qui sont stabilisées et titrées, la quantité de PrPsc dans les formes<br />
humaines est variable et dépendante du patient. En effet, la quantité de PrPsc va varier en fonction du<br />
stade de la maladie auquel est survenu le décès. Plus le stade sera avancé, plus la quantité de PrPsc sera<br />
importante. Mais il faut également préciser que la répartition cérébrale de la PrPsc n’est pas homogène, la<br />
quantité de PrPsc dans un homogénat d’une zone cérébrale donnée n’est donc pas représentative de la<br />
quantité de PrPsc accumulée au cours du développement de la maladie.<br />
- 76 -