MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion
Les données obtenues par détection directe de la PrPres sont en accord avec les résultats précédemment
obtenus par la méthode isotopique :
- Le double nettoyage s’avère plus efficace que le simple nettoyage pour un temps de contact
équivalent de 15 minutes.
- La formulation alcaline, à température ambiante en 30 minutes, est peu efficace lorsqu’il s’agit
d’éliminer des protéines adsorbées, dans un environnement exempt de matière lipidique.
- La formulation acide, efficace sur une salissure relativement lipidique, ne montre vis-à-vis des
protéines, que peu d’intérêt.
III.1.4. Discussion
D’après ces résultats, les procédés mettant en œuvre un double nettoyage par les Aniosyme N2 et DD1 et
l’étape de désinfection sont très intéressants lorsque l’on utilise une salissure à base de PrPres adsorbée.
Comparativement aux résultats de la méthode isotopique sur l’HSA et l’HFN adsorbées, on peut constater
que les procédés présentant des pourcentages de performance supérieurs à 50% dans le cadre du
nettoyage (figure III-4) confirment leur efficacité sur la PrPres.
La méthode de détection directe de la PrPres ne permet pas d’observer de différence d’efficacité
concernant les séquences du double nettoyage par les Aniosyme N2 et DD1 (de A6 à A11 et de A15 à
A17) alors que la méthode isotopique laissait présager une diminution de l’efficacité du double nettoyage
lors d’une double utilisation de l’Aniosyme DD1 (figure III-4 : DD1(10)-DD1(5)). En effet,
contrairement à la méthode isotopique, la détection de la PrPres directement sur le support ne permet pas
d’établir de classification des performances des formulations ou procédés. Il s’agit d’une méthodologie
ON/OFF.
Pour la plupart des procédés testés, aucun signal n’est observé sur la radiographie des lamelles. Cette
absence de signal suggère que la quantité de PrPres résiduelle est inférieure à la limite de détection de la
méthode. La limite de détection annoncée pour le système de révélation utilisé est de l’ordre de la dizaine
de femtogramme (10 -14 g) dans le cadre du Western blot. Cette valeur n’est probablement pas
représentative dans le cadre de cette application. On peut d’ailleurs se demander si la méthode de
détection par chimiluminescence est suffisamment sensible pour détecter une monocouche de protéines
adsorbées. En effet, lorsque le volume (connu) de PrPres est déposé sur la surface de la lamelle, seule la
première monocouche de PrPres est en interaction avec le substrat en acier inoxydable. Or, il est reconnu
que les protéines adsorbées subissent des modifications conformationnelles pour réduire l’énergie libre du
système ([Norde 1986, 1995, Norde et Lyklema 1991, Norde et Zoungrana 1998]. Les protéines des
couches supérieures, n’entrant pas en contact avec la surface, conserveraient leur structure native [Hook,
et al. 1998]. Ainsi, si la majeure partie de la salissure peut être éliminée lors du nettoyage, ce n’est
probablement pas le cas de la monocouche adsorbée (figure III-8). Ceci est d’ailleurs fortement suggéré
par la méthode isotopique puisque aucun procédé n’a permis d’atteindre la limite de détection de cette
méthode.
Protéines natives
Monocouche adsorbée
Surface
Avant Pendant Après
Figure III-8 : Schéma hypothétique illustrant le comportement de la monocouche de protéines
adsorbées ( ) et des couches supérieures de protéines natives ( ) avant, pendant et après le
nettoyage d’une surface.
- 74 -