MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
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Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion<br />
Les données obtenues par détection directe de la PrPres sont en accord avec les résultats précédemment<br />
obtenus par la méthode isotopique :<br />
- Le double nettoyage s’avère plus efficace que le simple nettoyage pour un temps de contact<br />
équivalent de 15 minutes.<br />
- La formulation alcaline, à température ambiante en 30 minutes, est peu efficace lorsqu’il s’agit<br />
d’éliminer des protéines adsorbées, dans un environnement exempt de matière lipidique.<br />
- La formulation acide, efficace sur une salissure relativement lipidique, ne montre vis-à-vis des<br />
protéines, que peu d’intérêt.<br />
III.1.4. Discussion<br />
D’après ces résultats, les procédés mettant en œuvre un double nettoyage par les Aniosyme N2 et DD1 et<br />
l’étape de désinfection sont très intéressants lorsque l’on utilise une salissure à base de PrPres adsorbée.<br />
Comparativement aux résultats de la méthode isotopique sur l’HSA et l’HFN adsorbées, on peut constater<br />
que les procédés présentant des pourcentages de performance supérieurs à 50% dans le cadre du<br />
nettoyage (figure III-4) confirment leur efficacité sur la PrPres.<br />
La méthode de détection directe de la PrPres ne permet pas d’observer de différence d’efficacité<br />
concernant les séquences du double nettoyage par les Aniosyme N2 et DD1 (de A6 à A11 et de A15 à<br />
A17) alors que la méthode isotopique laissait présager une diminution de l’efficacité du double nettoyage<br />
lors d’une double utilisation de l’Aniosyme DD1 (figure III-4 : DD1(10)-DD1(5)). En effet,<br />
contrairement à la méthode isotopique, la détection de la PrPres directement sur le support ne permet pas<br />
d’établir de classification des performances des formulations ou procédés. Il s’agit d’une méthodologie<br />
ON/OFF.<br />
Pour la plupart des procédés testés, aucun signal n’est observé sur la radiographie des lamelles. Cette<br />
absence de signal suggère que la quantité de PrPres résiduelle est inférieure à la limite de détection de la<br />
méthode. La limite de détection annoncée pour le système de révélation utilisé est de l’ordre de la dizaine<br />
de femtogramme (10 -14 g) dans le cadre du Western blot. Cette valeur n’est probablement pas<br />
représentative dans le cadre de cette application. On peut d’ailleurs se demander si la méthode de<br />
détection par chimiluminescence est suffisamment sensible pour détecter une monocouche de protéines<br />
adsorbées. En effet, lorsque le volume (connu) de PrPres est déposé sur la surface de la lamelle, seule la<br />
première monocouche de PrPres est en interaction avec le substrat en acier inoxydable. Or, il est reconnu<br />
que les protéines adsorbées subissent des modifications conformationnelles pour réduire l’énergie libre du<br />
système ([Norde 1986, 1995, Norde et Lyklema 1991, Norde et Zoungrana 1998]. Les protéines des<br />
couches supérieures, n’entrant pas en contact avec la surface, conserveraient leur structure native [Hook,<br />
et al. 1998]. Ainsi, si la majeure partie de la salissure peut être éliminée lors du nettoyage, ce n’est<br />
probablement pas le cas de la monocouche adsorbée (figure III-8). Ceci est d’ailleurs fortement suggéré<br />
par la méthode isotopique puisque aucun procédé n’a permis d’atteindre la limite de détection de cette<br />
méthode.<br />
Protéines natives<br />
Monocouche adsorbée<br />
Surface<br />
Avant Pendant Après<br />
Figure III-8 : Schéma hypothétique illustrant le comportement de la monocouche de protéines<br />
adsorbées ( ) et des couches supérieures de protéines natives ( ) avant, pendant et après le<br />
nettoyage d’une surface.<br />
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