MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion
III. EVALUATION DES PROCEDES VIS-A-VIS DE SOUILLURE CONTENANT
DE LA PROTEINE PRION
L’efficacité des formulations et procédés pour l’élimination de la protéine prion des surfaces d’acier
inoxydable est évaluée à la fois par des méthodes de détection directe et indirecte. Ces approches nous
permettront de nous intéresser aux effets de souches de prions dans l’évaluation des procédés.
III.1. Détection directe de la PrPres sur lamelles d’acier inoxydable
Dans un premier temps, les formulations et procédés sont évalués vis-à-vis de la PrPres d’une souche
animale, la souche 6PB1. Il s’agit de la souche de l’encéphalopathie spongiforme bovine (ESB) adaptée à
la souris [Lasmezas, et al. 1996].
Ces travaux sont réalisés par la société SPI-BIO sous la direction de Pascal Clayette.
III.1.1. Principe
Une quantité connue de PrPres est déposée sur des lamelles en acier inoxydable. Ces lamelles subissent
les différents traitements de nettoyage et/ou de désinfection, puis la PrPres résiduelle est détectée
directement sur les lamelles par une réaction immunologique utilisant un anticorps anti-PrP et un système
de révélation en chimiluminescence.
III.1.2. Méthodologie
Préparation de la PrPres
La PrPres est préparée à partir d’homogénat de cerveau 10% à l’aide du kit commercialisé par BioRad
« BSE purification kit » et d’une digestion à 10 µg/ml de protéinase K pendant une heure à 37°C.
Contamination des lamelles d’acier inoxydable
Les lamelles d’acier inoxydable d’environ 25 mm² sont contaminées par un inoculum de PrPres titré à 3,8
log. Les lamelles sont ensuite séchées une nuit sous hotte à flux laminaire pour favoriser l’adsorption de
la salissure.
Evaluation des formulations ou procédés
Une fois séchées, les lamelles sont placées dans des tubes de 2,2 ml et incubées en présence de 1 ml de la
formulation à tester. La lamelle contrôle est incubée dans 1 ml de l’eau du réseau utilisée pour la dilution
des formulations.
Les lamelles sont rincées à l’issue du traitement et entre chaque séquence du procédé par de l’eau du
réseau.
La nature des 19 formulations et/ ou procédés, ainsi que les conditions d’essais sont rappelés dans le
tableau III-3.
Détection de la PrPres résiduelle sur les lamelles
La PrPres résiduelle est directement détectée sur les lamelles par l’anticorps SAF83 couplé à la
péroxydase. Cet anticorps est spécifiquement dirigé contre la PrP de souris. La réaction immunologique
est révélée en chimiluminescence à l’aide du substrat « SuperSignal R-West Extended Duration
substrate » commercialisé par Pierce.
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