MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
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Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion<br />
III. EVALUATION DES PROCEDES VIS-A-VIS DE SOUILLURE CONTENANT<br />
DE LA PROTEINE PRION<br />
L’efficacité des formulations et procédés pour l’élimination de la protéine prion des surfaces d’acier<br />
inoxydable est évaluée à la fois par des méthodes de détection directe et indirecte. Ces approches nous<br />
permettront de nous intéresser aux effets de souches de prions dans l’évaluation des procédés.<br />
III.1. Détection directe de la PrPres sur lamelles d’acier inoxydable<br />
Dans un premier temps, les formulations et procédés sont évalués vis-à-vis de la PrPres d’une souche<br />
animale, la souche 6PB1. Il s’agit de la souche de l’encéphalopathie spongiforme bovine (ESB) adaptée à<br />
la souris [Lasmezas, et al. 1996].<br />
Ces travaux sont réalisés par la société SPI-BIO sous la direction de Pascal Clayette.<br />
III.1.1. Principe<br />
Une quantité connue de PrPres est déposée sur des lamelles en acier inoxydable. Ces lamelles subissent<br />
les différents traitements de nettoyage et/ou de désinfection, puis la PrPres résiduelle est détectée<br />
directement sur les lamelles par une réaction immunologique utilisant un anticorps anti-PrP et un système<br />
de révélation en chimiluminescence.<br />
III.1.2. Méthodologie<br />
Préparation de la PrPres<br />
La PrPres est préparée à partir d’homogénat de cerveau 10% à l’aide du kit commercialisé par BioRad<br />
« BSE purification kit » et d’une digestion à 10 µg/ml de protéinase K pendant une heure à 37°C.<br />
Contamination des lamelles d’acier inoxydable<br />
Les lamelles d’acier inoxydable d’environ 25 mm² sont contaminées par un inoculum de PrPres titré à 3,8<br />
log. Les lamelles sont ensuite séchées une nuit sous hotte à flux laminaire pour favoriser l’adsorption de<br />
la salissure.<br />
Evaluation des formulations ou procédés<br />
Une fois séchées, les lamelles sont placées dans des tubes de 2,2 ml et incubées en présence de 1 ml de la<br />
formulation à tester. La lamelle contrôle est incubée dans 1 ml de l’eau du réseau utilisée pour la dilution<br />
des formulations.<br />
Les lamelles sont rincées à l’issue du traitement et entre chaque séquence du procédé par de l’eau du<br />
réseau.<br />
La nature des 19 formulations et/ ou procédés, ainsi que les conditions d’essais sont rappelés dans le<br />
tableau III-3.<br />
Détection de la PrPres résiduelle sur les lamelles<br />
La PrPres résiduelle est directement détectée sur les lamelles par l’anticorps SAF83 couplé à la<br />
péroxydase. Cet anticorps est spécifiquement dirigé contre la PrP de souris. La réaction immunologique<br />
est révélée en chimiluminescence à l’aide du substrat « SuperSignal R-West Extended Duration<br />
substrate » commercialisé par Pierce.<br />
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