MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre III – Efficacité du Nettoyage et/ou de la Désinfection vis-à-vis de la protéine prion
prion est effectivement adsorbée sur les fils [Flechsig, et al. 2001]. Cependant, le signal observé n’a pu
être spécifiquement associé à la présence de PrPsc puisque l’anticorps utilisé n’est pas spécifique d’une
isoforme. Cependant, il est possible d’assurer une meilleure spécificité de la réaction immunologique en
contaminant le support avec de la PrPres.
La seconde approche consiste à détecter la protéine prion résiduelle par une technique de Western-blot.
Ceci nécessite une élution de la protéine prion à partir du support [Fichet, et al. 2004, Lemmer, et al.
2004]
Parallèlement à ces deux approches, la recherche de la protéine prion peut être effectuée à partir des
effluents du nettoyage [Lemmer, et al. 2004].
Le but de cette étude est de proposer un procédé dont l’efficacité est définie par sa capacité à éliminer la
protéine prion du support. L’inactivation du prion n’est pas l’objectif recherché en première intention. Les
étapes de nettoyage seront complétées par l’étape de désinfection, applicable aux DM thermosensibles,
afin de juger de l’efficacité du procédé dans sa globalité. Ce procédé devra d’autre part respecter la
chimie des matériaux.
Le terme « procédé » est défini, dans ce travail, comme étant l’utilisation successive de formulations,
chaque utilisation étant séparée de la précédente par un rinçage à l’eau.
Dans un premier temps, les formulations ou procédés permettant de réduire significativement la quantité
de protéines adsorbées sur des surfaces d’acier inoxydable seront sélectionnés par méthode isotopique à
l’iode 125. Nous avons effectivement montré, dans le chapitre précédent, l’utilité de cette méthode pour
évaluer quantitativement l’efficacité des formulations vis-à-vis de protéines adsorbées. La sélection sera
réalisée indépendamment sur deux solutions de protéines humaines : la sérum albumine (HSA) et le
fibrinogène (HFN).
Dans un deuxième temps, les formulations et/ou procédés seront testés vis-à-vis de la PrPres avec une
détection des protéines résiduelles directement sur le support.
Enfin, les formulations et/ou procédés qui auront été retenus par les méthodes précédentes seront évalués
sur fils d’acier inoxydable vis-à-vis de la protéine prion. Quatre souches animales de prions et deux types
de protéine prion humaine seront étudiés. Trois types de salissure seront également testés afin
d’appréhender l’incidence de l’environnement des prions sur l’efficacité du nettoyage.
II. SELECTION DES PROCEDES PAR METHODE ISOTOPIQUE
Le traitement des DM requière 5 étapes : le prétraitement, le nettoyage, le rinçage intermédiaire, la
désinfection et le rinçage final. Dans cette étude, nous focaliserons notre attention sur la phase de
nettoyage puis sur la phase de désinfection. Nous ne prendrons pas en compte l’étape de prétraitement.
La méthode isotopique, présentée dans le second chapitre, est mise en œuvre pour l’évaluation de
l’efficacité de formulations et de procédés vis-à-vis de protéines adsorbées. L’intérêt d’utiliser cette
méthode réside dans le fait de pouvoir évaluer l’efficacité du procédé à chacune de ces étapes.
Les formulations et procédés sont testés indépendamment vis-à-vis de deux protéines d’origine humaine
dont les propriétés physico-chimiques sont différentes. Il s’agit de l’HSA et l’HFN. Le choix de ces
protéines est motivé à la fois par leur origine humaine et plasmatique. Dans le chapitre précédent, la
méthode isotopique a été mise en œuvre sur de la sérum albumine d’origine bovine. Bien que l’homologie
de séquence entre la forme humaine et bovine de l’albumine soit de 76% [Gelamo, et al. 2002], il parait
plus judicieux d’évaluer la désorption des protéines d’origine humaine lorsqu’il s’agit de sélectionner les
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