MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre II – Evaluation du Nettoyage
La méthode isotopique est un outil également précieux pour évaluer l’efficacité du nettoyage puisque les
informations sur la qualité du nettoyage sont directement obtenues par la radioactivité résiduelle sur la
surface. Cette méthode permet donc d’évaluer un procédé dans sa globalité, mais également de suivre
l’évolution du procédé au cours de ces différentes étapes. C’est un atout majeur par rapport aux méthodes
nécessitant une élution des protéines et l’évaluation du rendement de l’élution. Enfin, cette méthode offre
une sensibilité adaptée à la problématique de la détergence puisque l’on peut détecter jusqu’à des
picogrammes de protéines [Vandenberg et Krull 1991].
L’affinité des protéines pour une même surface dans des conditions opératoires définies va dépendre de la
protéine elle-même, de par sa structure, la distribution de ses charges, son point isoélectrique, son poids
moléculaire, son hydrophobicité… Ces critères influencent également la désorption des protéines de la
surface. Ceci signifie que les performances observées vis-à-vis de la BSA ne pourront être totalement
extrapolées à l’ensemble des protéines, ni aux multiples protéines constitutives d’une salissure complexe
telle qu’un homogénat de cerveau.
Bien qu’une solution de BSA ne soit pas représentative d’une salissure retrouvée sur les DM, plusieurs
arguments justifient son utilisation dans cette étude :
- La majorité des travaux concernant la détergence montre que les protéines, dont la BSA, sont
difficilement éliminées des surfaces et que les procédés de nettoyage employés doivent être
drastiques pour être efficaces. Ceci est également vérifié dans le cas de la protéine prion ;
- Les protéines s’adsorbent de façon spontanée [Norde 1986, 1995, Norde et Lyklema 1991] et
cette adsorption est généralement décrite comme une étape initiatrice de divers processus comme
l’adhésion cellulaire [Dufrêne, et al. 1996, Ratner, et al. 1990], le développement des biofilms
ou encore la corrosion [Frateur, et al. 2006]. La BSA étant une protéine plasmatique, elle est
couramment utilisée pour modéliser l’adsorption des protéines du plasma. Il en est de même
pour le fibrinogène [Elwing, et al. 1989, Fangyan, et al. 1998, Hemmersam, et al. 2005].
- La BSA est décrite comme une protéine ayant une très forte affinité pour les surfaces d’acier
inoxydables [Cosman, et al. 2005].
- Bien que la méthode isotopique puisse être mise en œuvre en utilisant une salissure complexe,
l’interprétation des données est plus délicate en raison des interférences possibles entre les divers
constituants de la salissure (lipides, glucides, ions…).
IV. CONCLUSIONS
Trois méthodologies sont disponibles pour évaluer l’efficacité du nettoyage à travers les performances des
formulations. Ces trois méthodologies font appel à des techniques très différentes et leurs mises en œuvre
nécessitent d’adapter la salissure non seulement à la sensibilité, mais également à la spécificité de la
technique.
Une classification des performances de 5 formulations a été établie par chacune de ces méthodologies.
L’XPS et la méthode isotopique proposent un classement identique, qui diffère légèrement de celui
obtenu par le PND, très certainement en raison de la nature extrêmement lipidique de la salissure utilisée
pour cette méthode. De plus, le dosage des protéines nécessite leur élution préalable et son rendement
n’est jamais de 100%.
Ainsi, le Pouvoir Nettoyant Dégraissant (PND) permet une évaluation macroscopique de la performance
des formulations par un dosage colorimétrique des protéines. Bien que la salissure soit extrêmement
lipidique, le PND est adapté au screening des formulations les plus intéressantes.
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