MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
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Chapitre II – Evaluation du Nettoyage<br />
III.2.1. Le marquage des protéines par l’iode 125<br />
La méthode utilisée pour le marquage des protéines par l’iode 125 est une méthode d’oxydation chimique<br />
utilisant comme oxydant la chloramine T (Annexe 2) :<br />
I -<br />
Chloramine T<br />
O O O OH<br />
OH<br />
OH<br />
O - O - O - I<br />
I<br />
I +<br />
H<br />
H<br />
H O<br />
+<br />
+<br />
H 3 N<br />
H 3 N<br />
+<br />
H 3 N<br />
Figure II-15 : Iodation de la tyrosine par oxydation des iodures et substitution électrophile<br />
La substitution électrophile par l’iode 125 se fait en ortho- de l’hydroxyl du phénol des résidus de<br />
tyrosine et les dérivés obtenus sont essentiellement mono-iodés puisque les dérivés bi-iodés sont<br />
instables.<br />
L’iode 125 non incorporé est séparé des protéines iodées par chromatographie d’exclusion diffusion sur<br />
une colonne Sephadex G50. Le profil d’élution est établi en mesurant l’activité des fractions d’élution.<br />
Les fractions présentant les plus fortes concentrations en protéines marquées sont collectées et diluées<br />
dans une solution de protéine froide (non iodée) à 1mg/ml. L’activité spécifique (Ac Sp) de la solution est<br />
calculée selon la relation [Fangyan, et al. 1998] :<br />
Ac Sp<br />
=<br />
cpm<br />
V<br />
×<br />
Cs<br />
avec<br />
Ac Sp : l’activité spécifique de la solution (cpm/mg)<br />
cpm : coups par minute<br />
V: volume de la solution du comptage (ml)<br />
Cs : concentration de la solution de protéine (mg/ml)<br />
III.2.2. Adsorption de la BSA- 125 I sur acier inoxydable AISI304<br />
Les adsorptions sont réalisées en multiplaques 24 puits par immersion des substrats dans la solution de<br />
BSA- 125 I à 1 mg/ml pendant une heure sous agitation à température ambiante. Les substrats sont alors<br />
rincés par dilution successive à l’eau distillée afin d’éliminer les protéines non adsorbées. Ils sont ensuite<br />
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