MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre II – Evaluation du Nettoyage
III.2.1. Le marquage des protéines par l’iode 125
La méthode utilisée pour le marquage des protéines par l’iode 125 est une méthode d’oxydation chimique
utilisant comme oxydant la chloramine T (Annexe 2) :
I -
Chloramine T
O O O OH
OH
OH
O - O - O - I
I
I +
H
H
H O
+
+
H 3 N
H 3 N
+
H 3 N
Figure II-15 : Iodation de la tyrosine par oxydation des iodures et substitution électrophile
La substitution électrophile par l’iode 125 se fait en ortho- de l’hydroxyl du phénol des résidus de
tyrosine et les dérivés obtenus sont essentiellement mono-iodés puisque les dérivés bi-iodés sont
instables.
L’iode 125 non incorporé est séparé des protéines iodées par chromatographie d’exclusion diffusion sur
une colonne Sephadex G50. Le profil d’élution est établi en mesurant l’activité des fractions d’élution.
Les fractions présentant les plus fortes concentrations en protéines marquées sont collectées et diluées
dans une solution de protéine froide (non iodée) à 1mg/ml. L’activité spécifique (Ac Sp) de la solution est
calculée selon la relation [Fangyan, et al. 1998] :
Ac Sp
=
cpm
V
×
Cs
avec
Ac Sp : l’activité spécifique de la solution (cpm/mg)
cpm : coups par minute
V: volume de la solution du comptage (ml)
Cs : concentration de la solution de protéine (mg/ml)
III.2.2. Adsorption de la BSA- 125 I sur acier inoxydable AISI304
Les adsorptions sont réalisées en multiplaques 24 puits par immersion des substrats dans la solution de
BSA- 125 I à 1 mg/ml pendant une heure sous agitation à température ambiante. Les substrats sont alors
rincés par dilution successive à l’eau distillée afin d’éliminer les protéines non adsorbées. Ils sont ensuite
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