MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Annexe 4 – Les Biais Méthodologiques
sur la figure A3-4(a) et sont comparés aux essais contrôles précipités par l’acide trichloracétique et
présentés sur la figure A3-4(b).
W
N2 A - avec SQ
PK - + - + - +
(a)
(b) N2
TCA
A -
PK - - - -
Figure A4-4 : Comparaison des techniques de précipitation des protéines associées à l’inhibition des
enzymes par l’acidité du pH. (a) Précipitation par l’Acide phosphotungstique (W), (b) Précipitation
par l’acide trichloracétique (TCA).
La comparaison des résultats obtenus pour la formulation Aniosyme N2 par la précipitation à l’acide
phosphotungstique (figure A3-4(a-N2) et par l’acide trichloracétique (figure A3-4 (b-N2) suggèrent que
la fonction de précipitation de l’acide trichloracétique est responsable des faux résultats positifs obtenus.
Dans les deux cas, l’activité enzymatique est inhibée par l’acidité du pH.
Les résultats obtenus pour la formulation « A - avec SQ» par ces deux techniques de précipitation ne sont
pas de différents. Ceux-ci suggèrent que l’inhibition enzymatique par l’acidité du pH, en présence de
tensioactif anionique, n’introduit pas de biais dans la méthodologie et ce quelle que soit la technique de
précipitation mise en œuvre.
Les résultats présentés ont mis en évidence les problèmes méthodologiques rencontrés. Il est extrêmement
compliqué de s’intéresser à la triade prion-enzymes-tensioactifs. Etudier l’activité enzymatique vis-à-vis
de la protéine prion en présence de tensioactifs constitue un véritable challenge. En effet, en présence du
tensioactif anionique (le lauryléthersulfate), l’inhibition de l’activité enzymatique par la chaleur introduit
des risques de faux résultats positifs quelle soit la technique de précipitation ou de concentration utilisée.
En présence des tensioactifs de l’Aniosyme N2, c’est la technique de précipitation par l’acide
trichloracétique qui génère de tels risques et ce indépendamment du mode d’inhibition de l’activité
enzymatique. Au regard de ces données, l’inhibition de l’activité enzymatique par l’acidité du pH
associée à la technique de précipitation par l’acide phosphotungstique offre donc les meilleurs compromis
méthodologique.
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