MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Annexe 4 – Les Biais Méthodologiques
ANNEXE 4
LES BIAIS INTRODUITS PAR LA
METHODOLOGIE
INHIBITION ENZYMATIQUE ET PRECIPITATION DES PROTEINES
Cette annexe fait suite au chapitre 3 pour présenter les biais méthodologiques rencontrés dans le cadre de
l’optimisation de l’activité enzymatique de la formulation Aniosyme N2.
Les tensioactifs non ioniques et amphotères de l’Aniosyme N2 ont été substitué par un tensioactif
anionique (A - ) : le lauryléthersulfate à 3 moles d’oxyde d’éthylène. L’HC est traité par la formulation
« A - » avec ou sans séquestrant (SQ). L’activité enzymatique est inhibée par la chaleur et la protéine prion
est précipitée par l’acide phosphotungstique. Les résultats sont présentés sur la figure A3-1 pour des
temps d’exposition croissants en chimiluminescence. Chaque essai est réalisé en duplicats.
A - sans SQ
A - avec SQ
N2
PK - + - + - + - + - +
(a)
(b)
(c)
Figure A4-1 : Western blot de la PrP traitée par l’Aniosyme N2 et sa variante anionique (A - ) avec
ou sans séquestrant (SQ). L’activité enzymatique est inhibée par la chaleur et la PrP est précipitée
par l’acide phosphotungstique. N2 : Aniosyme N2 ; PK : protéinase K. (a) révélation Dura 2 min ;
(b) révélation SuperSignal Dura 16 min et (c) révélation SuperSignal Femto 12 min.
En présence du tensioactif anionique, on observe une importante diminution du signal, comparativement
à la formulation de référence Aniosyme N2 (N2). Cette diminution du signal est encore plus significative
en présence de séquestrant.
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