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MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

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Annexe 3 – Le Western blot<br />

IV.5. Immunodétection<br />

Les différentes étapes décrites dans le paragraphe III.2 sont illustrées pour l’immunodétection par l’Ac<br />

3F4.<br />

Blocage<br />

PBS lait écremé 5%<br />

1h<br />

Anticorps Primaire<br />

Ac 3F4<br />

1/10 000 e en PBS Tween 0,1%<br />

1h<br />

Rinçage<br />

PBS Tween 0,1%<br />

Anticorps Secondaire<br />

Ac Anti-IgG de souris-HRP<br />

1/20 000 e en PBS Tween 0,1%<br />

30 min<br />

Rinçage PBS Tween 0,1%<br />

PBS<br />

Chimiluminescence<br />

SuperSignal (Pierce)<br />

ECL Plus (Amersham)<br />

Temps d’exposition fonction<br />

de l’intensité du signal<br />

(de 30 sec à une heure)<br />

Développement<br />

Film photo Kodak<br />

Révélateur / Rinçage / Fixateur<br />

45 sec / 30 sec / 45 sec<br />

- 197 -

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