MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
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Annexe 2 – Marquage des protéines par l’Iode 125<br />
ANNEXE 2<br />
MARQUAGE DES PROTEINES PAR L’IODE 125<br />
I. PRINCIPE<br />
La protéine est marquée à l’iode 125 par la méthode à la Chloramine T puis purifiée par chromatographie<br />
sur colonne de Sephadex G50f.<br />
II. REACTIFS<br />
- Iodure de NaI 125 IMS30 (Amersham)<br />
- Protéines HSA (Sérum Albumine Humaine) et HFN (Fibrinogène Humain)<br />
- Dihydrogénophosphate de potassium KH 2 PO 4<br />
- Chloramine T<br />
- Pyrosulfite de sodium Na 2 S 2 O 5<br />
- Iodure de potassium KI<br />
- NaOH 5M<br />
- Azoture de sodium NaN 3<br />
- Hydrogenophosphate de sodium Na 2 HPO 4 , 2H 2 O<br />
- Colonne de Séphadex G50f (Pharmacia) H = 20 cm, ∅ = 1 cm<br />
III. MATERIELS<br />
- Tubes plastiques 5 et 10 ml avec bouchons<br />
- Pipettes graduées de 5 ou 10 ml<br />
- Piipettes de 2, 10, 20, 50 et 200 µl<br />
- Pompe péristaltique<br />
- Chronomètre<br />
- pHmètre<br />
- Bechers<br />
- Activimètre<br />
- Compteur gamma (WALLAC 1261 Multigamma counter)<br />
IV. PREPARATION DES TAMPONS ET SOLUTIONS<br />
Tampon phosphate 0,25M :<br />
34 g de KH 2 PO 4 par litre d’eau permutée de qualité MilliQ<br />
Ajusté le pH à 7,4 avec NaOH 5M<br />
Tampon phosphate 0,05M :<br />
6,8 g de KH 2 PO 4 par litre d’eau permutée de qualité MilliQ<br />
Ajusté le pH à 7,4 avec NaOH 5M<br />
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