MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Conclusion Générale
CONCLUSION GENERALE
Au terme de ces trois années d’une collaboration étroite entre les Laboratoires ANIOS de Lille, l’Hôpital
Neurologique de Lyon et l’Ecole Centrale de Lyon, nous sommes parvenus à proposer un procédé de
nettoyage efficace à l’encontre du risque prion. Son efficacité a été établie in vitro vis-à-vis de salissures
cérébrales lipidiques contenant de la protéine prion d’origine humaine et animale. Ce procédé consiste à
employer successivement une formulation nettoyante puis une formulation nettoyante/pré-désinfectante
au cours de l’étape du double nettoyage. L’efficacité de ce procédé devant être démontrée in vivo, la
preuve finale de son efficacité ne sera établie qu’après les essais d’inoculation à l’animal.
Au cours de la validation in vitro de ce procédé, nous avons montré la pertinence du double nettoyage
recommandé par la circulaire 138 du 14 mars 2001. Nous avons néanmoins mis en évidence la nécessité
de privilégier, en première intention, l’utilisation de formulations dont l’activité est exclusivement
détersive, la présence de principes actifs anti-microbiens minimisant l’efficacité globale du procédé.
Ainsi, le procédé proposé permet de garantir successivement l’efficacité du nettoyage, vis-à-vis des
ATNC en particulier, puis celle de la pré-désinfection à l’encontre des agents pathogènes conventionnels.
La démarche expérimentale mise en œuvre pour parvenir à la validation de ce procédé s’est avérée
particulièrement adaptée compte tenu de la complexité de la problématique et des contraintes liées à la
manipulation des prions. En effet, évaluer l’efficacité du nettoyage (ou la performance des formulations)
nécessite de définir à la fois le niveau de propreté attendu et la nature de la contamination à éliminer. Du
niveau de propreté requis dépend la sensibilité de la technique mise en oeuvre. Vis-à-vis du risque prion,
le seuil de propreté attendu nécessite d’augmenter la sensibilité des méthodes d’évaluation puisque la
dose minimale infectieuse n’est pas connue. Ainsi, les techniques proposées, la spectroscopie de
photoélectrons (XPS) et le radiomarquage des protéines à l’iode 125, sont particulièrement adaptées. Elles
présentent des sensibilités inférieures à la monocouche de protéines adsorbées et mettent en évidence la
présence de protéines résiduelles directement sur la surface. L’XPS permet également d’établir la
compatibilité chimique entre les formulations détergentes et le matériau ainsi que la rinçabilité des
produits chimiques entrant dans la composition des formulations. Les principaux inconvénients de l’XPS
sont palliés par la méthode isotopique qui est à la fois quantitative et spécifique des protéines. Ces
techniques sont de ce fait complémentaires. Leur mise en oeuvre nous a initialement permis de
hiérarchiser les formulations en fonction de leur capacité à éliminer les protéines adsorbées.
Ultérieurement, leur utilisation conjointe a largement participé à la compréhension des interactions
existant entre les protéines, les surfaces et les molécules entrant dans la composition des formulations que
sont les enzymes et les principes actifs anti-microbiens. Nous avons effectivement montré que les
enzymes sont des composants particulièrement actifs dans la définition d’une formulation performante.
Elles participent à l’élimination des salissures qui leur sont spécifiques et agissent non seulement dans la
solution de nettoyage mais également à la surface des matériaux. Associée à de bonnes performances
détergentes, il est probable que l’activité surfacique des enzymes permettrait de réduire significativement
l’infectiosité de la protéine prion. Les effets négatifs des principes actifs anti-microbiens et en particulier
du PHMB sur l’activité détergente ont également été mis en évidence. Nos travaux montrent que ces
effets sont la conséquence d’un antagonisme entre les mécanismes de la détergence et de la désinfection.
Bien que la technique XPS et la méthode isotopique permettent d’évaluer les performances des
formulations et l’efficacité du nettoyage, elles ne peuvent être spécifiquement appliquées au risque prion.
Nous avons donc développé une méthode de détection indirecte de la protéine prion (PrP) sur fils d’acier
inoxydable afin d’évaluer in vitro l’efficacité des procédés de nettoyage et de désinfection vis-à-vis de la
PrP adsorbée. Cette méthode nous a permis d’abaisser les limites de détection de la protéine prion
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