MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
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Conclusion Générale<br />
CONCLUSION GENERALE<br />
Au terme de ces trois années d’une collaboration étroite entre les Laboratoires ANIOS de Lille, l’Hôpital<br />
Neurologique de <strong>Lyon</strong> et l’<strong>Ecole</strong> <strong>Centrale</strong> de <strong>Lyon</strong>, nous sommes parvenus à proposer un procédé de<br />
nettoyage efficace à l’encontre du risque prion. Son efficacité a été établie in vitro vis-à-vis de salissures<br />
cérébrales lipidiques contenant de la protéine prion d’origine humaine et animale. Ce procédé consiste à<br />
employer successivement une formulation nettoyante puis une formulation nettoyante/pré-désinfectante<br />
au cours de l’étape du double nettoyage. L’efficacité de ce procédé devant être démontrée in vivo, la<br />
preuve finale de son efficacité ne sera établie qu’après les essais d’inoculation à l’animal.<br />
Au cours de la validation in vitro de ce procédé, nous avons montré la pertinence du double nettoyage<br />
recommandé par la circulaire 138 du 14 mars 2001. Nous avons néanmoins mis en évidence la nécessité<br />
de privilégier, en première intention, l’utilisation de formulations dont l’activité est exclusivement<br />
détersive, la présence de principes actifs anti-microbiens minimisant l’efficacité globale du procédé.<br />
Ainsi, le procédé proposé permet de garantir successivement l’efficacité du nettoyage, vis-à-vis des<br />
ATNC en particulier, puis celle de la pré-désinfection à l’encontre des agents pathogènes conventionnels.<br />
La démarche expérimentale mise en œuvre pour parvenir à la validation de ce procédé s’est avérée<br />
particulièrement adaptée compte tenu de la complexité de la problématique et des contraintes liées à la<br />
manipulation des prions. En effet, évaluer l’efficacité du nettoyage (ou la performance des formulations)<br />
nécessite de définir à la fois le niveau de propreté attendu et la nature de la contamination à éliminer. Du<br />
niveau de propreté requis dépend la sensibilité de la technique mise en oeuvre. Vis-à-vis du risque prion,<br />
le seuil de propreté attendu nécessite d’augmenter la sensibilité des méthodes d’évaluation puisque la<br />
dose minimale infectieuse n’est pas connue. Ainsi, les techniques proposées, la spectroscopie de<br />
photoélectrons (XPS) et le radiomarquage des protéines à l’iode 125, sont particulièrement adaptées. Elles<br />
présentent des sensibilités inférieures à la monocouche de protéines adsorbées et mettent en évidence la<br />
présence de protéines résiduelles directement sur la surface. L’XPS permet également d’établir la<br />
compatibilité chimique entre les formulations détergentes et le matériau ainsi que la rinçabilité des<br />
produits chimiques entrant dans la composition des formulations. Les principaux inconvénients de l’XPS<br />
sont palliés par la méthode isotopique qui est à la fois quantitative et spécifique des protéines. Ces<br />
techniques sont de ce fait complémentaires. Leur mise en oeuvre nous a initialement permis de<br />
hiérarchiser les formulations en fonction de leur capacité à éliminer les protéines adsorbées.<br />
Ultérieurement, leur utilisation conjointe a largement participé à la compréhension des interactions<br />
existant entre les protéines, les surfaces et les molécules entrant dans la composition des formulations que<br />
sont les enzymes et les principes actifs anti-microbiens. Nous avons effectivement montré que les<br />
enzymes sont des composants particulièrement actifs dans la définition d’une formulation performante.<br />
Elles participent à l’élimination des salissures qui leur sont spécifiques et agissent non seulement dans la<br />
solution de nettoyage mais également à la surface des matériaux. Associée à de bonnes performances<br />
détergentes, il est probable que l’activité surfacique des enzymes permettrait de réduire significativement<br />
l’infectiosité de la protéine prion. Les effets négatifs des principes actifs anti-microbiens et en particulier<br />
du PHMB sur l’activité détergente ont également été mis en évidence. Nos travaux montrent que ces<br />
effets sont la conséquence d’un antagonisme entre les mécanismes de la détergence et de la désinfection.<br />
Bien que la technique XPS et la méthode isotopique permettent d’évaluer les performances des<br />
formulations et l’efficacité du nettoyage, elles ne peuvent être spécifiquement appliquées au risque prion.<br />
Nous avons donc développé une méthode de détection indirecte de la protéine prion (PrP) sur fils d’acier<br />
inoxydable afin d’évaluer in vitro l’efficacité des procédés de nettoyage et de désinfection vis-à-vis de la<br />
PrP adsorbée. Cette méthode nous a permis d’abaisser les limites de détection de la protéine prion<br />
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